ELISA試劑盒的測(cè)定原理

測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何的診斷劑離不開(kāi)好的原料，如抗原，酶等。以前用于測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原，而則為純化抗原動(dòng)物后獲得的多和使用雜交瘤技術(shù)得到的，而抗原或的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過(guò)各種化學(xué)合成方法制備。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或及其酶結(jié)合物等測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑，各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。

ELISA試劑盒的特點(diǎn)

一、靈敏、特異的抗體；

二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

四、適用血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；

五、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測(cè)物在樣品分析過(guò)程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標(biāo)液1PPM，就是1毫克/升，而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升，就是說(shuō)你的回收率是99%，這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系，說(shuō)明方法的準(zhǔn)確度。比如水中總無(wú)機(jī)氯含量測(cè)定，樣品水中含有無(wú)機(jī)氯20mg/L，取100mL被測(cè)水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無(wú)機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)樣品，測(cè)定時(shí)忽略體積變化，如果測(cè)定出樣品中無(wú)機(jī)氯為29.8mg/L，則認(rèn)為回收率為99%。

Elisa試劑盒——Elisa實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

重復(fù)性不佳，高CV值 

1  樣品不均一 加樣前充分混勻樣品，取樣確保移液位置一致；

2  包被板表面遭到破壞 洗板加樣時(shí)盡量小心，避免破壞板的包被表面

3  孔與孔之間的交叉污染 孵育后取下蓋子小心操作，避免孔與孔的污染；封板膜不能重復(fù)使用

4  加樣量不一致 樣品稀釋前應(yīng)充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴

5  邊緣效應(yīng)（外周孔顯色較中心孔深） 孵育時(shí)盡量100 rpm旋轉(zhuǎn)混勻

6  微量加樣不準(zhǔn)確 保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性

7  不正確的洗滌 洗液準(zhǔn)確配制；充分洗滌，靜置15秒，確定每一步的洗滌

不正常的標(biāo)準(zhǔn)曲線

1  錯(cuò)誤的方法重懸標(biāo)準(zhǔn)品  加入正確量的溶液重懸標(biāo)準(zhǔn)品，重懸充分

2  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤  按照說(shuō)明書要求稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

3  標(biāo)準(zhǔn)品污染  使用一次性的滅菌吸頭， 標(biāo)準(zhǔn)品貯存于2-8 ℃

4  錯(cuò)誤的倍比稀釋步驟  按照說(shuō)明書倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

5  波長(zhǎng)選擇錯(cuò)誤 TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而 前者比色波長(zhǎng)為450nm，后者為492nm。雙波長(zhǎng)比色分析優(yōu)于單波長(zhǎng)。

6  標(biāo)準(zhǔn)品混用  不同批號(hào)試劑勿混用

7  試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng)，溫度太高，標(biāo)準(zhǔn)品失活  盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫

8  ELISA未終止而直接檢測(cè)450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測(cè)，否則會(huì)出現(xiàn)620nm比450nm讀數(shù)高的現(xiàn)象。（數(shù)值仍有梯度規(guī)律）