蛋白質(zhì)結(jié)晶方法

液-液擴散(Liquid–Liquid Diffusion) 這種方法中，蛋白質(zhì)溶液和含有沉淀劑的溶液是彼此分層在一個有小孔的毛細管中，一個測熔點用的毛細管一般即可（如圖1.2）。下層是密度大的溶液，例如銨或PEG溶液。如果如MPD被用作沉淀劑，它會在上層。以1：1混合，沉淀劑的濃度應該是所期終濃度的二倍。兩種溶液（各自約5μl）通過針頭導入毛細管，先導入下層的。通過一個簡易的搖擺式離心機去除氣泡。再加入上層，進而兩層之間形成一個明顯的界面，它們會逐漸彼此擴散。 Garc′?a-Ruiz and Moreno（1994）已經(jīng)發(fā)展液-液擴散技術(shù)至法。蛋白質(zhì)溶液通過毛細力被吸入狹窄的管中，管的一端是封閉的。接著，開放端入置于小容器的凝膠中，凝膠使得管豎直，蛋白質(zhì)溶液與凝膠接觸。含有沉淀劑的溶液被倒在凝膠上，整個裝置被保存于封閉的盒子以防蒸發(fā)。沉淀劑通過凝膠和毛細管的擴散時間可以由毛細管插入凝膠的深度控制，從而蛋白質(zhì)溶液中即可形成過飽和區(qū)域，毛細管底部高而頂部低。這也可作為一個篩選佳結(jié)晶條件的額外信息。

蛋白結(jié)晶板使用

用于人工和高通量蛋白晶體生長以及其他生物或有機晶體生長的設備和方法.一微孔板包含多個單元格,以及一限定微孔板中單元格的邊框.在每個單元格中至少存在一個上部開口的孔.單元格中的每個孔底部可以封閉,或者其底部是開口的,但孔底部由一獨立部件封閉,其可以為獨立的膜或板(例如塑料,玻璃或金屬)或一模制部件。

獲得晶體及提高晶體質(zhì)量是蛋白質(zhì)結(jié)晶方法學中的兩大基本問題.為解決這兩個問題,結(jié)構(gòu)生物學家已發(fā)展了許多方法,其中針對蛋白質(zhì)本身進行分子改造是非常重要的方法之一.通過蛋白質(zhì)工程技術(shù),如突變,還原化修飾,剪切或刪除構(gòu)象柔性環(huán)區(qū),融合蛋白,復合物共結(jié)晶,原位蛋白質(zhì)水解等方法對蛋白質(zhì)本身進行分子改造。

蛋白結(jié)晶板發(fā)展

可明顯提高其結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量.隨著該方面成功案例的不斷積累,分子改造技術(shù)越來越凸顯出其在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析中的重要作用,特別是對一些難以結(jié)晶或提高晶體質(zhì)量的蛋白質(zhì)而言,其應用價值更不可忽視.針對近年來分子改造技術(shù)在蛋白質(zhì)結(jié)晶中的應用進行了回顧與總結(jié),并展望了其未來的發(fā)展。

在高密度微孔板技術(shù)和DNA微陣列技術(shù)的基礎上發(fā)展起來的蛋白質(zhì)芯片技術(shù),能夠在蛋白質(zhì)水平上進行基因高通量表達分析,從而成為蛋白質(zhì)組學研究的有效方法.蛋白質(zhì)芯片依靠手工,壓印或噴墨的方法將探針蛋白點樣在化學膜,凝膠,微孔板或玻片上形成陣列,經(jīng)過與樣品的雜交捕獲靶蛋白。

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