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以下內(nèi)容是由北京旭鑫盛科有限公司提供,希望對同行業(yè)有所幫助!
如需了解更多主營各種研磨儀,粉碎儀,破碎儀,篩分儀等前處理設(shè)備,歡迎關(guān)注北京旭鑫盛科有限公司網(wǎng)站或撥打圖片上的電話咨詢,我司會為您提供專業(yè),周到的服務(wù)。
多樣品組織研磨儀與組織研磨儀兩者均為實驗室的常用的儀器工具,其主要適用于:研磨、細胞破碎、勻漿、材料分散、樣品混勻、材料分散、組織均質(zhì)、振蕩等。新型電機的應用以及電機直接傳動使得高通量組織研磨儀維護十分方便。
應用范圍(區(qū)別-優(yōu)勢):可研磨樣品:
植物組織(根、莖、葉、花、果、種子等)
動物組織(大腦、心臟、肺、胃、胸腺、腸、淋巴、肌肉、骨骼等)
真菌細菌(酵母等)
食品藥品 (各類食品、藥片等)
易揮發(fā)樣品(煤炭、油頁巖、蠟制品等)
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DNA的粗提
1) 將高通量組織研磨儀研磨好的樣品取出于65℃水浴45min,中途間隔(輕柔)振蕩三次混勻;
2) 冷卻后加入等體積:易戊醇(24:1),輕柔顛倒混勻使乳化10min;
3) 7000g-8000g離心10min(18-20℃);
4) 吸取上清于另一干凈的離心管中;
5) (根據(jù)需要可用氯放:易戊醇如上法重復抽提一次,吸取上清);
6) 加入與上清液等體積
7) 離心法沉淀DNA;
8) 在75%乙醇中漂洗DNA數(shù)分鐘以上,用Tip頭吸干乙醇;
9) 用1ml 75%乙醇再漂洗一次;
10) 沉淀于室溫或64℃以下的恒溫箱中干燥片刻至剛出現(xiàn)半透明,不要過度干燥;
11) 用50μlTE溶解沉淀,可用65℃水浴助溶,DNA粗提物可用于粗略PCR等。
利用高通量組織研磨儀對要進行DNA提取的植物樣品研磨的好處在于:研磨過程中,不會對植物組織造成破壞,可根據(jù)需要選擇干磨、濕磨及冷凍研磨,封閉式的樣品管,避免樣品交叉污染。
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每50~100mg 組織加入0.2體積 TRIzol
1.加鋼球1顆,設(shè)置研磨儀參數(shù):12單位振頻,1min,每種樣品基本充分勻漿
2. 將上述勻漿液每0.2體積 TRIzol 試劑用量的勻漿液中加入0.04體積氯方,蓋緊管蓋,手動劇烈震搖15 秒鐘,然后室溫靜置2~3 分鐘。
3. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。
4. 小心吸取上層水相(無色)加入到新試管中,同時計算所吸取的水相體積。不必過多吸取,防止吸入DNA和蛋白雜質(zhì)(中間層,白色)。
5. 加入所吸取水相等體積預冷的異丙淳,蓋緊管蓋,輕輕搖勻。
6. 室溫靜置10 分鐘,待RNA 充分沉淀(為減少RNA 降解,此步驟可省略)。
7. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。
8. 將上清棄除(注意別丟棄沉淀),每管加入0.2體積75%乙醇潤洗,蓋緊管蓋,輕輕晃動試管,以去除殘留的異丙淳和鹽份。4℃ 7,500g 離心5 分鐘。
9. 將上清棄除(注意別丟棄沉淀),打開管蓋,將RNA 沉淀干燥(室溫揮發(fā)或真空干燥)。注意RNA 沉淀不可完全干燥,否則難以溶解。
10. 將RNA 沉淀溶解于適量的無RNase 水中。如果RNA 沉淀溶解不完全,將使OD260/OD280≤1.6。此RNA 溶液可用于進一步實驗,或者-70℃保存。