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武漢賽爾夫科技有限公司是一家專業(yè)的色譜儀器和色譜消耗品的生產(chǎn)商和供應(yīng)商。我們一直致力于色譜分析和色譜分離純化技術(shù)研究,公司產(chǎn)品包括分析型液相色譜儀,半制備、制備型液相色譜儀。
離子檢測器分為兩大類,即電化學(xué)檢測器和光學(xué)檢測器,電化學(xué)檢測器包括電導(dǎo)、直流安培、脈沖安培和積分安培等,而光學(xué)檢測器包括紫外、可見光和熒光檢測器。柱子有多種類型,不僅材質(zhì)不一,填料也有很多學(xué)問,下面簡要的說說關(guān)于柱子的一些情況:各種規(guī)格的玻璃柱子在實(shí)驗(yàn)室里頭很容易得到,而且價(jià)格低廉,但玻璃柱子致命的弱點(diǎn)是它能承受的壓力很小,且非常容易破碎。其中電導(dǎo)檢測器是離子色譜的檢測器,現(xiàn)簡單介紹如下。所有的離子化合物(有機(jī)離子、無機(jī)離子、強(qiáng)酸和強(qiáng)堿)以及可被解離的化合物(弱酸和弱堿)的水溶液都能夠?qū)щ?。電?dǎo)檢測器就是以離子色譜流動(dòng)相中導(dǎo)電的變化作為定量的依據(jù)的。
分配色譜法這種色譜的流動(dòng)相和固定相都是液體,樣品分子在兩個(gè)液相之間很快達(dá)到平衡分配,利用各組分在兩相中分配系數(shù)的差異進(jìn)行分離,類似于萃取過程。而液相色譜是常溫操作,不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制,它非常適合相對分子量較大,難汽化,不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)、離子型化合物和高聚物的分離分析,大約占有機(jī)物的70%~80%。一般常用的固定液有β,β'-氧二(ODPN)、聚乙二醇(PEG400~4000)、撐乙二醇(TMG)和角鯊?fù)?SQ)。采用與氣相色譜(GC)同樣的方法,將固定液涂漬在多孔的載體表面,但在使用中固定液易流失。目前,應(yīng)用較多的是鍵合固定相。在這種固體相中,固定液不是涂在載體表面,而是通過化學(xué)反應(yīng)在純硅膠顆粒表面鍵合上某種有機(jī)基團(tuán)。例如,利用氯代十八與硅膠表面的羥基(-OH)之間的反應(yīng)就可以形成一化表面。這種固定液的優(yōu)點(diǎn)是不易被流動(dòng)相剝蝕。在分配色譜法中,流動(dòng)相可為純?nèi)軇?,也可以采用混合溶劑進(jìn)行梯度淋洗,其極性應(yīng)與固定液差別大一些,以避免兩者之間相溶。通??煞譃檎喾峙浜头聪喾峙?br />
基本原理液相色譜(High Performance Liquid Chromatography,HPLC),是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上,于20世紀(jì)60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。②高速:分析速度快、載液流速快,較經(jīng)典液體色譜法速度快得多,通常分析一個(gè)樣品在15~30分鐘,有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成,一般小于1小時(shí)。與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻。因?yàn)檩^小的填充顆粒具有高柱效,但會(huì)引起高阻力,需用高壓輸送流動(dòng)相,故又稱高壓液相色譜。使用液相色譜時(shí),液體待檢測物被注入色譜柱,通過壓力在固定相中移動(dòng),由于被測物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同,不同的物質(zhì)順序離開色譜柱,通過檢測器得到不同的峰信號,后通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質(zhì)。液相色譜作為一種重要的分析方法,廣泛地應(yīng)用于化學(xué)和生化分析中。液相色譜從原理上與經(jīng)典的液相色譜沒有本質(zhì)的差別,它的特點(diǎn)是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和微粒固定相,適于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機(jī)化合物。
樣品的前處理:制備色譜柱子由于處理的樣品多,比分析柱子更容易受污染,所以,必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過濾、結(jié)晶、固相萃取等簡單的分離方法,如果用得上,而且還不是很麻煩,就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì)。固定相的選擇硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。高壓泵的一般壓強(qiáng)為l.47~4.4X10Pa,流速可調(diào)且穩(wěn)定,當(dāng)高壓流動(dòng)相通過層析柱時(shí),可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng),可加快其在柱中的移動(dòng)速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。 有不少文獻(xiàn)報(bào)道,對填料可以進(jìn)行一下處理提高了分離效果,如,對硅膠進(jìn)行的硝1酸銀(或緩沖液)處理。