將色譜柱的出口端插入裝有己烷的樣品瓶中，正常情況下，我們可以看見瓶中穩(wěn)定持續(xù)的氣泡。如果沒有氣泡，就要重新檢查一氣裝置和流量控制器等是否正確設(shè)置，并檢查一下整個(gè)氣路有無泄漏。（2）成箱購買市售純凈水，這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。等所有問題解決后，將色譜柱出口從瓶中取出，保證柱端口無溶劑殘留，再進(jìn)行下一步的安裝。 將色譜柱連接于檢測(cè)器上其安裝和所需注意的事項(xiàng)與色譜柱與進(jìn)樣口連接大致相同。如果在應(yīng)用中系統(tǒng)所使用的是ECD或NPD等，那么在老化色譜柱時(shí)，應(yīng)該將柱子與檢測(cè)器斷開，這樣檢測(cè)器可能會(huì)更快達(dá)到穩(wěn)定。確定載氣流量，再對(duì)色譜柱的安裝進(jìn)行檢查注意：如果不通入載氣就對(duì)色譜柱進(jìn)行加熱，會(huì)快速且性的損壞色譜柱。 色譜柱的老化色譜柱安裝和系統(tǒng)檢漏工作完成后，就可以對(duì)色譜柱進(jìn)行老化了。

色譜分析法、層析法，是一種分離和分析方法，現(xiàn)代生物企業(yè)生產(chǎn)過程中的核心技術(shù)之一。在分析化學(xué)、有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)等領(lǐng)域有著非常廣泛的應(yīng)用。因此在定期清洗進(jìn)樣器，使用緩沖液后，要用水進(jìn)行充分的沖洗，以防沉積結(jié)晶鹽，磨損轉(zhuǎn)子。色譜法利用不同物質(zhì)在不同相態(tài)的選擇性分配，以流動(dòng)相對(duì)固定相中的混合物進(jìn)行洗脫，混合物中不同的物質(zhì)會(huì)以不同的速度沿固定相移動(dòng)，終達(dá)到分離的效果。色譜理論：保留時(shí)間保留時(shí)間是樣品從進(jìn)入色譜柱到流出色譜柱所需要的時(shí)間，不同的物質(zhì)在不同的色譜柱上以不同的流動(dòng)相洗脫會(huì)有不同的保留時(shí)間，因此保留時(shí)間是色譜分析法比較重要的參數(shù)之一。保留時(shí)間由物質(zhì)在色譜中的分配系數(shù)決定：tR = t0(1 KVs / Vm)式中tR表示某物質(zhì)的保留時(shí)間，t0是色譜系統(tǒng)的死時(shí)間，即流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱到流出色譜柱的時(shí)間，這個(gè)時(shí)間由色譜柱的孔隙、流動(dòng)相的流速等因素決定。K為分配系數(shù)，VsVm表示固定相和流動(dòng)相的體積。這個(gè)公式又叫做色譜過程方程，是色譜學(xué)基本的公式之一。

液相色譜儀流動(dòng)相性質(zhì)：     1、底劑決定基本的色譜分離，洗脫劑對(duì)某幾個(gè)組分選擇分離。這就是在配制流動(dòng)相時(shí)造成的細(xì)菌污染的原因，解決它的方法很簡(jiǎn)單，就是確保水的可靠性。流動(dòng)相組成改變，極性改變，可顯著改變組分分離狀況。     2、親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定相的極性，稱為正相液液色譜，極性柱稱正相柱，正相柱的底劑用低極性溶劑，洗脫劑用極性較強(qiáng)的溶劑。     3、若流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，稱為反相液液色譜。非極性柱稱為反相柱，反相柱常以水為流動(dòng)相的主體，再加入不同配比的有機(jī)溶1劑做調(diào)節(jié)劑。

液相色譜儀與氣相色譜儀的區(qū)別：

　　1．分析對(duì)象的區(qū)別

　　GC：適于能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品；但對(duì)高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型及高聚物的樣品，尤其對(duì)大多數(shù)生化樣品不可檢測(cè)占有機(jī)物的20%

　　HPLC：適于溶解后能制成溶液的樣品(包括有機(jī)介質(zhì)溶液)，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，對(duì)分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差的生化樣品及高分子和離子型樣品均可檢測(cè)用途廣泛，占有機(jī)物的80%

　　2．流動(dòng)相差別的區(qū)別

　　GC：流動(dòng)相為惰性，氣體組分與流動(dòng)相無親合作用力，只與固定相有相互作用。

　　HPLC：流動(dòng)相為液體，流動(dòng)相與組分間有親合作用力，能提高柱的選擇性、改善分離度，對(duì)分離起正向作用。且流動(dòng)相種類較多，選擇余地廣，改變流動(dòng)相極性和pH值也對(duì)分離起到調(diào)控作用，當(dāng)選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動(dòng)相也可以增大分離選擇性。且流動(dòng)相種類較多，選擇余地廣，改變流動(dòng)相極性和pH值也對(duì)分離起到調(diào)控作用，當(dāng)選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動(dòng)相也可以增大分離選擇性。