色譜法的應(yīng)用可以根據(jù)目的分為制備性色譜和分析性色譜兩大類。制備性色譜的目的是分離混合物,獲得一定數(shù)量的純凈組分,這包括對(duì)有機(jī)合成產(chǎn)物的純化、天然產(chǎn)物的分離純化以及去離子水的制備等。相對(duì)于色譜法出現(xiàn)之前的純化分離技術(shù)如重結(jié)晶,色譜法能夠在一步操作之內(nèi)完成對(duì)混合物的分離,但是色譜法分離純化的產(chǎn)量有限,只適合于實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。制備色譜到底是什么?(1)分析色譜的目的,是分析出混合物中一個(gè)(或者幾個(gè))純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的,是從混合物中得到純物質(zhì)。為了加快分離的時(shí)間與提高分離的效率,制備色譜的的進(jìn)樣品量很大,導(dǎo)致制備色譜柱子的分離負(fù)荷的相應(yīng)加大,也就必須加大色譜柱填料,增大制備色譜的直徑和長(zhǎng)度,使用的相對(duì)多的流動(dòng)相。然而,當(dāng)色譜柱上樣品負(fù)載加大的時(shí)候,往往導(dǎo)致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品。制備色譜,要解決容量與柱子效果之間的矛盾,對(duì)重現(xiàn)性也要考慮。從經(jīng)濟(jì)上來(lái)說(shuō)。制備色譜要爭(zhēng)取少用填料,少用溶劑,要盡可能多的得到產(chǎn)品。(2)樣品的前處理:制備色譜柱子由于處理的樣品多,比分析柱子更容易受污染,所以,必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過(guò)濾、結(jié)晶、固相萃取等簡(jiǎn)單的分離方法,如果用得上,而且還不是很麻煩,就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì)。通常來(lái)說(shuō),色譜柱的入口應(yīng)保持在進(jìn)樣口的中下部,當(dāng)進(jìn)樣針穿過(guò)隔墊完全插入進(jìn)樣口后如果針尖與色譜柱入口相差1-2cm,這就是較為理想的狀態(tài)。(3)固定相的選擇硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹(shù)脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。 有不少文獻(xiàn)報(bào)道,對(duì)填料可以進(jìn)行一下處理提高了分離效果,如,對(duì)硅膠進(jìn)行的(或緩沖液)處理。
液相色譜儀是一種非常先進(jìn)的分析儀器,氣主要采用液相色譜法,是一種使用液體當(dāng)做流動(dòng)相的色譜儀器,在當(dāng)今涉及到多個(gè)行業(yè)領(lǐng)域,液相色譜儀應(yīng)用范圍非常廣。
液相色譜儀是色譜儀器之一,剛才我們也說(shuō)到了,它是億液體為流動(dòng)相進(jìn)行分析。液相色譜儀采用高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內(nèi)各成分被分離后,進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。它的主要特點(diǎn)有高速、高壓、高靈敏度,液相色譜儀比傳統(tǒng)的液相色譜儀速度要快、靈敏度也高、色譜柱可以反復(fù)使用、分辨率高等等,所以現(xiàn)在很多都選擇液相色譜儀。吸附劑的顆粒應(yīng)盡可能保持大小均勻,以保證良好的分離效果,除另有規(guī)定外通常多采用直徑為0。
液相色譜儀的應(yīng)用范圍非常廣,現(xiàn)在涉及多個(gè)領(lǐng)域,已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等科學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。
LC-100液相色譜系統(tǒng)分析前準(zhǔn)備: 1、流動(dòng)相前處理:將流動(dòng)相經(jīng)過(guò)0.45um的微孔濾膜過(guò)濾后,倒入流動(dòng)相瓶中,放入超聲波清洗器內(nèi)震蕩排氣20分鐘左右。 2、流動(dòng)相安裝:將處理好的流動(dòng)相放在儲(chǔ)液托盤(pán)上,將對(duì)應(yīng)通道的洗液管路分別放入流動(dòng)相瓶中,蓋好瓶蓋并記好對(duì)應(yīng)通道的流動(dòng)相種類?! ?、樣品記錄:將樣品處理稀釋后使用注射1器過(guò)濾頭過(guò)濾后裝入1.5ml樣品瓶中(大約三分之二),放入自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品架上,并記錄樣品瓶位置以便設(shè)置批處理文件?! ?、色譜柱安裝:打開(kāi)柱溫箱門(mén),將色譜柱的出口端安裝在色譜柱夾具上,在色譜柱上連接配管,在色譜柱出口端連接檢測(cè)器入口端的藍(lán)色PEEK管?! ?、檢查清洗液:在RINSE通道內(nèi)放置50%甲1醇:水溶液;含有兩根管路的通道內(nèi)放置10%異丙1醇:水溶液。柱流失檢測(cè)在色譜柱老化過(guò)程結(jié)束后,利用程序升溫作一次空白試驗(yàn)(不進(jìn)樣)。

液相色譜儀所用基本概念是保留值、塔板數(shù)、塔板高度、分離度、選擇性等與氣相色譜一致。液相色譜所用基本理論:塔板理論與速率方程也與氣相色譜基本一致,但由于在氣相色譜中以液體代替氣相色譜中氣體作為流動(dòng)相,而液體和氣體的性質(zhì)不相同。液相色譜所用的儀器設(shè)備和操作條件也與氣相色譜不同,所以,液相色譜與氣相色譜有一定的差別。主要有以下幾方面: 1、操作條件及應(yīng)用范圍不同: 對(duì)于氣相色譜,是加溫操作。僅能分析在操作溫度下能汽化而不分解的物質(zhì),對(duì)高沸點(diǎn)化合物、非揮發(fā)性物質(zhì)、熱不穩(wěn)定化合物、離子型化合物及高聚物的分離、分析較為困難,致使其應(yīng)用受到一定程度的限制,據(jù)統(tǒng)計(jì)只有大約20%的機(jī)物能用氣相色譜分析。色譜柱是進(jìn)行色譜分析的主要儀器,色譜柱的正確安裝才能保證發(fā)揮其的性能和延長(zhǎng)使用壽命。 而液相色譜是常溫操作,不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制,它非常適合相對(duì)分子量較大,難汽化,不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)、離子型化合物和高聚物的分離分析,大約占有機(jī)物的70%~80%。