反相色譜(RPC)是指利用非極性的反相介質(zhì)為固定相，極性有機溶1劑的水溶液為流動相，根據(jù)溶質(zhì)極性(疏水性)的差別進行溶質(zhì)分離與純化的洗脫色譜法。與HIC一樣，RPC中溶質(zhì)也通過疏水性相互作用分配于固定相表面，但是，RPC固定相表面完全被非極性基團所覆蓋，表現(xiàn)出強烈的疏水性。因此，必須用極性有機溶1劑或其水溶液進行溶質(zhì)的洗脫分離。將色譜柱連接于進樣口上色譜柱在進樣口中插入深度根據(jù)所使用的GC儀器不同而定。溶質(zhì)在反相介質(zhì)上的分配系數(shù)取決于溶質(zhì)的疏水性，一般疏水性越大，分配系數(shù)越大。當(dāng)固定相一定時，可以通過調(diào)節(jié)流動相的組成調(diào)整溶質(zhì)的分配系數(shù)。RPC主要應(yīng)用于相對分子質(zhì)量低于5000，特別是1000以下的非極性小分子物質(zhì)的分析和純化，也可以用于蛋白質(zhì)等生物大分子的分析和純化。由于反相介質(zhì)表面為強烈疏水性，并且流動相為低極性的有機溶1劑，生物活性大分子在RPC分離過程中容易變性失活，所以，以回收生物活性蛋白質(zhì)為目的時，應(yīng)注意選用適宜的反相介質(zhì)。

塞桿密封墊 現(xiàn)象：在高壓下壓力不穩(wěn)定，從泵頭滲漏流動相液體，反映在分析結(jié)果上是樣品保留時間的改變。原因：墊圈與運動著的柱塞桿緊緊接觸，是液相色譜系統(tǒng)中易磨損的部件。近幾十年色譜作為一種強大的分離技術(shù)與MS等檢測手段的聯(lián)用得到了極大的發(fā)展，GC－MS，HPLC－MS等在檢測，食品安全分析等方面應(yīng)用廣泛，是成熟的分析方法。緩沖液或其它含鹽的流動相更加速墊圈的磨損。墊圈磨損是不可避免的。措施：一旦墊圈損壞只有進行更換。更換時注意要將柱塞桿縮至后，松開泵頭的兩根收緊螺釘，操作時處處以平衡的動作進行，切不可搖動或上下擺動泵頭，否則柱塞桿極易折斷。

LC-100液相色譜系統(tǒng)分析前準(zhǔn)備：　　1、流動相前處理：將流動相經(jīng)過0.45um的微孔濾膜過濾后，倒入流動相瓶中，放入超聲波清洗器內(nèi)震蕩排氣20分鐘左右?！　?、流動相安裝：將處理好的流動相放在儲液托盤上，將對應(yīng)通道的洗液管路分別放入流動相瓶中，蓋好瓶蓋并記好對應(yīng)通道的流動相種類。色譜柱的老化色譜柱安裝和系統(tǒng)檢漏工作完成后，就可以對色譜柱進行老化了。　　3、樣品記錄：將樣品處理稀釋后使用注射1器過濾頭過濾后裝入1.5ml樣品瓶中（大約三分之二），放入自動進樣器的樣品架上，并記錄樣品瓶位置以便設(shè)置批處理文件?！　?、色譜柱安裝：打開柱溫箱門，將色譜柱的出口端安裝在色譜柱夾具上，在色譜柱上連接配管，在色譜柱出口端連接檢測器入口端的藍(lán)色PEEK管。　　5、檢查清洗液：在RINSE通道內(nèi)放置50%甲1醇：水溶液；含有兩根管路的通道內(nèi)放置10%異丙1醇：水溶液。

色譜柱中的流動相會排干嗎？　　不少做色譜分離試驗的人遇到過這樣的情形：不慎未及時補充流動相，泵將溶劑瓶中的流動相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實上，如果泵將溶劑瓶中的流動相吸干，并不會造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會將空氣排入色譜柱。因為泵只能輸送液體，而不能輸送空氣。相比之下，另一個更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。這就是在配制流動相時造成的細(xì)菌污染的原因，解決它的方法很簡單，就是確保水的可靠性。同樣，整個色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長的時間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了?？梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要沖一個小時或更多的時間被徹底浸潤，恢復(fù)到正常狀態(tài)。