色譜法的應(yīng)用可以根據(jù)目的分為制備性色譜和分析性色譜兩大類(lèi)。制備性色譜的目的是分離混合物,獲得一定數(shù)量的純凈組分,這包括對(duì)有機(jī)合成產(chǎn)物的純化、天然產(chǎn)物的分離純化以及去離子水的制備等。相對(duì)于色譜法出現(xiàn)之前的純化分離技術(shù)如重結(jié)晶,色譜法能夠在一步操作之內(nèi)完成對(duì)混合物的分離,但是色譜法分離純化的產(chǎn)量有限,只適合于實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。制備色譜到底是什么?(1)分析色譜的目的,是分析出混合物中一個(gè)(或者幾個(gè))純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的,是從混合物中得到純物質(zhì)。為了加快分離的時(shí)間與提高分離的效率,制備色譜的的進(jìn)樣品量很大,導(dǎo)致制備色譜柱子的分離負(fù)荷的相應(yīng)加大,也就必須加大色譜柱填料,增大制備色譜的直徑和長(zhǎng)度,使用的相對(duì)多的流動(dòng)相。然而,當(dāng)色譜柱上樣品負(fù)載加大的時(shí)候,往往導(dǎo)致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品。制備色譜,要解決容量與柱子效果之間的矛盾,對(duì)重現(xiàn)性也要考慮。從經(jīng)濟(jì)上來(lái)說(shuō)。制備色譜要爭(zhēng)取少用填料,少用溶劑,要盡可能多的得到產(chǎn)品。(2)樣品的前處理:制備色譜柱子由于處理的樣品多,比分析柱子更容易受污染,所以,必要的前處理就顯得非常的必要。接通載氣當(dāng)色譜柱與進(jìn)樣口接好后,通載氣,調(diào)節(jié)柱前壓以得到合適的載氣流速。萃取、過(guò)濾、結(jié)晶、固相萃取等簡(jiǎn)單的分離方法,如果用得上,而且還不是很麻煩,就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì)。(3)固定相的選擇硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹(shù)脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。 有不少文獻(xiàn)報(bào)道,對(duì)填料可以進(jìn)行一下處理提高了分離效果,如,對(duì)硅膠進(jìn)行的(或緩沖液)處理。

在運(yùn)作的過(guò)程中液相色譜儀的分析速度是非??斓模d液的流速也非???,所以它能夠很快的得出結(jié)果,有的分析樣品可以在15到半個(gè)小時(shí)內(nèi)得出結(jié)果,有的只需要五分鐘就夠了,這是因?yàn)椴煌后w的成分不同,所以得出結(jié)果的速度也完全不一樣,大部分的液體時(shí)間都低于一個(gè)小時(shí),從中我們可以看出液相色譜儀的工作效率?,F(xiàn)在的液相色譜儀有著的特點(diǎn),首先就體現(xiàn)在它的分離效果非常好,大家可以自由的選擇固體流動(dòng)或者是液體流動(dòng),根據(jù)你所選擇的效果能夠達(dá)到Z佳的分離效果,同時(shí)這要比工業(yè)精餾塔和色相譜的分析更加,測(cè)量出來(lái)的結(jié)果一般是不會(huì)有任何錯(cuò)誤的,這是液相色譜儀非常厲害的一點(diǎn)。后,液相色譜儀的靈敏度也是非常高的,它可以用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果的度非常高。將色譜柱連接于檢測(cè)器上其安裝和所需注意的事項(xiàng)與色譜柱與進(jìn)樣口連接大致相同。由此我們可以看出,液相色譜儀的優(yōu)點(diǎn)是非常多的,正是因?yàn)樗膬?yōu)點(diǎn)很多,人們才愿意去使用它,在使用了液相色譜儀之后大家獲得了極大的方便,相信以后它會(huì)變得更加普及的。
超液相色譜法(HPLC)是繼氣相色譜之后,70年代初期發(fā)展起來(lái)的一種以液體做流動(dòng)相的新色譜技術(shù)。 超液相色譜是在氣相色譜和經(jīng)典色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的?,F(xiàn)代液相色譜和經(jīng)典液相色譜沒(méi)有本質(zhì)的區(qū)別。不同點(diǎn)僅僅是現(xiàn)代液相色譜比經(jīng)典液相色譜有較高的效率和實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化操作。經(jīng)典的液相色譜法,流動(dòng)相在常壓下輸送,所用的固定相柱效低,分析周期長(zhǎng)。而現(xiàn)代液相色譜法引用了氣相色譜的理論,流動(dòng)相改為高壓輸送(高輸送壓力可達(dá)4.9?107Pa);色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成,從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜;同時(shí)柱后連有高靈敏度的檢測(cè)器,可對(duì)流出物進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)。因此,液相色譜具有分析速度快、分離效能高、自動(dòng)化等特點(diǎn)。所以人們稱(chēng)它為高壓、高速、或現(xiàn)代液相色譜法。顆粒類(lèi)型主要有全多孔和表面多孔,全多孔填料具有更大的柱容量、更多鍵合相選擇的優(yōu)點(diǎn),表面多孔具有反壓低、峰形好的優(yōu)點(diǎn)。