色譜法,又稱層析法。根據(jù)其分離原理,有吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與排阻色譜等方法。吸附色譜是利用吸附劑對被分離物質(zhì)的吸附能力不同,用溶劑或氣體洗脫,以使組分分離。常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、聚酰胺等有吸附活性的物質(zhì)。分配色譜是利用溶液中被分離物質(zhì)在兩相中分配系數(shù)不同,以使組分分離。與HIC一樣,RPC中溶質(zhì)也通過疏水性相互作用分配于固定相表面,但是,RPC固定相表面完全被非極性基團(tuán)所覆蓋,表現(xiàn)出強(qiáng)烈的疏水性。其中一相為液體,涂布或使之鍵合在固體載體上,稱固定相;另一相為液體或氣體,稱流動相。常用的載體有硅膠、硅藻土、硅鎂型吸附劑與纖維素粉等。離子交換色譜是利用被分離物質(zhì)在離子交換樹脂上的離子交換勢不同而使組分分離。常用的有不同強(qiáng)度的陽、陰離子交換樹脂,流動相一般為水或含有的緩沖液。排阻色譜又稱凝膠色譜或凝膠滲透色譜,是利用被分離物質(zhì)分子量大小的不同和在填料上滲透程度的不同,以使組分分離。常用的填料有分子篩、葡聚糖凝膠、微孔聚合物、微孔硅膠或玻璃珠等,可根據(jù)載體和試樣的性質(zhì),選用水或?yàn)榱鲃酉唷?br />

透明流路管:指的是在過濾頭和輸送泵之間的那一段管路。這一個(gè)部分往往不是有點(diǎn)氣泡,而經(jīng)常是整個(gè)管中全是空氣而操作人員卻渾然不知,以致輸送泵工作了半天才發(fā)現(xiàn)流動相瓶里的液體一點(diǎn)也沒少。這也是我們常說的液相色譜儀至少一周要開機(jī)一次的原因(我們做液相一定要有“微滲”的概論)。如果還是繼續(xù)的老化,不僅對色譜柱有損壞而且始終得不到正常穩(wěn)定的基線。如果長時(shí)間不用,這一段管路的液體會徹底干掉,而充滿空氣的管路和充滿液體的管路不仔細(xì)看是分辨不出來的。這種情況對于輸送泵很危險(xiǎn),因?yàn)楸脧脑O(shè)計(jì)來說是輸送液體而不是輸送氣體,內(nèi)部的液體對于活塞來說起到了機(jī)油的作用,如果活塞桿還殘存了一些緩沖鹽,則極易拉傷,造成不可逆轉(zhuǎn)的影響。對于這種情況,要突出“預(yù)防為主”如:液相色譜使用人員要相對固定和穩(wěn)定,工作中合理搭源,每臺機(jī)一周至少一次實(shí)驗(yàn),如長期不用起碼每周要沖流動相2小時(shí)。養(yǎng)成良好的工作習(xí)慣很重要。

中壓液相色譜(MPLC)柱壓在5-20bar(或75-300psi)之間,廣泛用于實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)規(guī)模的生物制品(如動物臟器提取液、濃縮液、體液、植物提取液、生物技術(shù)發(fā)酵液等--往往需要經(jīng)過濾膜作初級凈化)的處理,以提取或純化所需的產(chǎn)品。 高壓液相色譜(HPLC)是指柱壓一般大于20bar(或300psi)的“高壓(或)液相色譜”,通常指所用色譜柱的塔板數(shù)大于2000,一般是在2,000~20,000的范圍之間。(2)成箱購買市售純凈水,這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。