色譜分析法、層析法，是一種分離和分析方法，現(xiàn)代生物企業(yè)生產(chǎn)過程中的核心技術(shù)之一。在分析化學(xué)、有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)等領(lǐng)域有著非常廣泛的應(yīng)用。色譜法利用不同物質(zhì)在不同相態(tài)的選擇性分配，以流動(dòng)相對(duì)固定相中的混合物進(jìn)行洗脫，混合物中不同的物質(zhì)會(huì)以不同的速度沿固定相移動(dòng)，終達(dá)到分離的效果。色譜理論：保留時(shí)間保留時(shí)間是樣品從進(jìn)入色譜柱到流出色譜柱所需要的時(shí)間，不同的物質(zhì)在不同的色譜柱上以不同的流動(dòng)相洗脫會(huì)有不同的保留時(shí)間，因此保留時(shí)間是色譜分析法比較重要的參數(shù)之一。保留時(shí)間由物質(zhì)在色譜中的分配系數(shù)決定：tR = t0(1 KVs / Vm)式中tR表示某物質(zhì)的保留時(shí)間，t0是色譜系統(tǒng)的死時(shí)間，即流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱到流出色譜柱的時(shí)間，這個(gè)時(shí)間由色譜柱的孔隙、流動(dòng)相的流速等因素決定。K為分配系數(shù)，VsVm表示固定相和流動(dòng)相的體積。這個(gè)公式又叫做色譜過程方程，是色譜學(xué)基本的公式之一。3、與國內(nèi)單位合作即柱筒內(nèi)壁采用精密的拋光技術(shù)和同心化技術(shù)，使往壁的光潔度（>。

液相色譜儀的保養(yǎng)維護(hù)與氣相色譜儀沒有多大區(qū)別，液相色譜儀的幾個(gè)維護(hù)保養(yǎng)的部件，液相色譜儀的主要部件有色譜柱、進(jìn)樣器、檢測(cè)器、泵，下面我們分別來說明這幾大部件的保養(yǎng)維護(hù)方面。

色譜柱大家都不陌生，是我們做分析的必需品，無論是液相色譜儀還是氣相色譜儀都離不開色譜柱。色譜柱是化合物分離的關(guān)鍵，我們?cè)诎惭b時(shí)要保證閥件管路的清潔，并且不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震蕩色譜柱，在長期不使用色譜柱的時(shí)候要用保存封閉，分析結(jié)束后要用流動(dòng)相或適當(dāng)?shù)娜軇┣逑瓷V柱，流動(dòng)相在使用前必須進(jìn)行脫氣處理，盡量不使用或少使用高粘度的流動(dòng)相，在滿足靈敏度的前提下，盡可能的使用小進(jìn)樣量。如果樣品比較臟，要進(jìn)行凈化或提純處理。進(jìn)樣器是液相色譜儀的主要部分之一，我們也要定期進(jìn)行維護(hù)工作。液相色譜儀的檢測(cè)器在每次分析完成要立即關(guān)閉。 泵是液相色譜儀的心臟，我們要定期維護(hù)保養(yǎng)，這樣才能使得其處于狀態(tài)，能報(bào)保證基線平穩(wěn)，保留時(shí)間重現(xiàn)性好，梯度洗脫時(shí)壓力變化緩慢而且平穩(wěn)。當(dāng)柱子分離過含有高水分樣品后，需要將色譜柱重新老化，以除去固定相中吸附的水分。

LC-100液相色譜系統(tǒng)分析前準(zhǔn)備：　　1、流動(dòng)相前處理：將流動(dòng)相經(jīng)過0.45um的微孔濾膜過濾后，倒入流動(dòng)相瓶中，放入超聲波清洗器內(nèi)震蕩排氣20分鐘左右?！　?、流動(dòng)相安裝：將處理好的流動(dòng)相放在儲(chǔ)液托盤上，將對(duì)應(yīng)通道的洗液管路分別放入流動(dòng)相瓶中，蓋好瓶蓋并記好對(duì)應(yīng)通道的流動(dòng)相種類。　　3、樣品記錄：將樣品處理稀釋后使用注射1器過濾頭過濾后裝入1.5ml樣品瓶中（大約三分之二），放入自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品架上，并記錄樣品瓶位置以便設(shè)置批處理文件?！　?、色譜柱安裝：打開柱溫箱門，將色譜柱的出口端安裝在色譜柱夾具上，在色譜柱上連接配管，在色譜柱出口端連接檢測(cè)器入口端的藍(lán)色PEEK管?！　?、檢查清洗液：在RINSE通道內(nèi)放置50%甲1醇：水溶液；如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有的燒杯用超聲波清洗。含有兩根管路的通道內(nèi)放置10%異丙1醇：水溶液。

色譜分離原理

液相色譜法按分離機(jī)制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法(正相與反相)、離子交換色譜法、離子對(duì)色譜法及分子排阻色譜法。

1.液固色譜法　使用固體吸附劑，被分離組分在色譜柱上分離原理是根據(jù)固定相對(duì)組分吸附力大小不同而分離。分離過程是一個(gè)吸附-解吸附的平衡過程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度5~10μm。適用于分離分子量200~1000的組分，大多數(shù)用于非離子型化合物，離子型化合物易產(chǎn)生拖尾。常用于分離同分異構(gòu)體。當(dāng)然選項(xiàng)用PEEK接頭是一較好是一個(gè)較好的解決方法，不僅通用性好，而且靠手?jǐn)Q就能保證不漏液。

2.液液色譜法　使用將特定的液態(tài)物質(zhì)涂于擔(dān)體表面，或化學(xué)鍵合于擔(dān)體表面而形成的固定相，分離原理是根據(jù)被分離的組分在流動(dòng)相和固定相中溶解度不同而分離。分離過程是一個(gè)分配平衡過程。

涂布式固定相應(yīng)具有良好的惰性;流動(dòng)相必須預(yù)先用固定相飽和，以減少固定相從擔(dān)體表面流失;溫度的變化和不同批號(hào)流動(dòng)相的區(qū)別常引起柱子的變化;另外在流動(dòng)相中存在的固定相也使樣品的分離和收集復(fù)雜化。由于涂布式固定相很難避免固定液流失，現(xiàn)在已很少采用?，F(xiàn)在多采用的是化學(xué)鍵合固定相，如C18、C8、氨基柱、基柱和柱。制備型加壓液相色譜，按照色譜柱和樣品量的大小，分為：（1）低壓液相色譜。