等溫核酸試劑盒

重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)（RPA)是2006年由英國科學(xué)家研發(fā)的一種核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。它是利用多種酶參與，在體外模擬生物體內(nèi)DNA復(fù)印，恒溫條件下短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)靶基因大量擴(kuò)增，既可以擴(kuò)增DNA，也可以擴(kuò)增RNA。RPA技術(shù)具有恒溫、快速、便攜、靈敏度高、特異性強(qiáng)和操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，是目前很有望替代PCR技術(shù)的核酸等溫?cái)U(kuò)增方法，在基層現(xiàn)場(chǎng)診斷中，具有廣闊的應(yīng)用前景。

相對(duì)來說RPA是很好的恒溫?cái)U(kuò)增法，可在較低溫下恒溫?cái)U(kuò)增，不需要復(fù)雜儀器設(shè)備，操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)時(shí)間短，特異性好、靈敏度高，可采用電泳、熒光、側(cè)向流試紙等多種方式檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。

普通的提取實(shí)驗(yàn)用國產(chǎn)的試劑盒就足以，價(jià)格不高，基本上各地均有現(xiàn)貨，如天根（目前國內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷售面比較廣的一種）等，其價(jià)格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯(cuò)，性價(jià)比還可以。

當(dāng)然，就RNA的提取而言，不一定試劑盒的提取效果就非常好，其實(shí)采用一些經(jīng)典的RNA提取方法，效果也很不錯(cuò)，如：TRIZOL、EDTA等，只是試劑盒使用方便，經(jīng)典的方法操作復(fù)雜一些。

FAQ

1 RPA能實(shí)現(xiàn)多重化嗎?

可以。RPA技術(shù)支持在同一個(gè)管中同時(shí)進(jìn)行多個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)。不過，多重化的引物組合需要精心設(shè)計(jì)，以便每個(gè)引物都能同樣有效的工作。需要注意的是，RPA反應(yīng)的引物總量(nmol)不要超標(biāo)太多。如果在一個(gè)反應(yīng)中使用兩個(gè)以上的擴(kuò)增引物，就應(yīng)該控制不同引物的量。另外，我們應(yīng)當(dāng)事先考慮好檢測(cè)多個(gè)擴(kuò)增事件的探針、設(shè)備以及熒光團(tuán)的兼容性。

數(shù)字PCR法和熒光PCR法的關(guān)鍵區(qū)別在于檢測(cè)結(jié)果的定量和相對(duì)定量差異。據(jù)了解，現(xiàn)階段數(shù)字PCR試劑和機(jī)器相價(jià)格加高（一臺(tái)儀器近百萬元），在SARS-CoV-2快速檢測(cè)中的優(yōu)勢(shì)并不大。

不過，由于具備自動(dòng)化程度更好、耗時(shí)更短等技術(shù)優(yōu)勢(shì)，國內(nèi)多家掌握了數(shù)字PCR技術(shù)的核酸試劑研發(fā)企業(yè)正在嘗試開發(fā)適用于SARS-CoV-2檢測(cè)的相關(guān)試劑盒。