等溫核酸試劑盒

核酸試劑盒的原理

核酸檢測，其實(shí)就是通過檢測熒光信號的累積來確定樣本中是否有病毒核酸?，F(xiàn)在核酸檢測試劑盒（多重?zé)晒釸T-PCR法），能夠?qū)崿F(xiàn)一小時(shí)快速精準(zhǔn)診斷。

根據(jù)銳科技發(fā)布的文章《如何進(jìn)行核酸檢測帶你揭秘全過程》，目前的病毒核酸檢測試劑盒，多數(shù)采用熒光定量PCR方法。檢測原理是以病毒獨(dú)特的基因序列為檢測靶標(biāo)，通過PCR擴(kuò)增，使我們的選擇這段靶標(biāo)DNA序列指數(shù)級增加，每一個(gè)擴(kuò)增出來的DNA序列，都可與我們預(yù)先加入的一段熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號，擴(kuò)增出來的靶基因越多，累計(jì)的熒光信號就越強(qiáng)。

核酸試劑盒

樣本采集質(zhì)控重要性

樣本采集作為核酸檢測的首步，其中涉及的采樣耗材和病毒保存液的質(zhì)量保證對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要，不合格樣本會(huì)直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。在新冠核酸檢測中，不合格樣本通常是由于采樣問題和采樣用具問題導(dǎo)致的。

合格的病毒保存液目前主要要求兩點(diǎn)：

1.保證病毒的充分滅活，防止采樣、運(yùn)輸和檢測過程的風(fēng)險(xiǎn)。

2.保證病毒核酸（RNA）在采集、運(yùn)輸過程中的穩(wěn)定性，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，防止樣本運(yùn)輸保存過程中降解導(dǎo)致檢測的“假陰性”。

試劑盒

英國TwistDx Inc公司開發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)--被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)，目前全球新的等溫?cái)U(kuò)增檢測技術(shù)。以此為基礎(chǔ)的TwistAmp? 核酸擴(kuò)增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進(jìn)行常溫下的單分子核酸檢測。該技術(shù)對硬件設(shè)備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物防御和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。常規(guī)PCR必須經(jīng)過變性、退火、延伸三個(gè)步驟，而PCR儀本質(zhì)上就是一個(gè)控制溫度升降的設(shè)備。RPA反應(yīng)的適宜溫度在37°C - 42°C之間，無需變性，在常溫下即可進(jìn)行。這無疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要溫控設(shè)備，RPA可以真正實(shí)現(xiàn)便攜式的快速核酸檢測。據(jù)介紹，RPA檢測的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴(kuò)增到可以檢出的水平，從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理，適用于無法提取核酸的實(shí)地檢測。RPA不僅可以對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行終點(diǎn)檢測，還可以對擴(kuò)增過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，甚至可以通過試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。

目前，TwistAmp? 試劑盒的擴(kuò)增子長度在500bp以內(nèi)。不過，經(jīng)過特別優(yōu)化的RPA擴(kuò)增，也可以生成更長的擴(kuò)增產(chǎn)物，或者減慢擴(kuò)增速度(便于定量)，甚至在更低的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。