固相萃取柱萃取步驟

1. 柱預(yù)處理（柱活化）

用適當(dāng)?shù)娜軇┝芟碨PE 柱，以使吸附劑保持濕潤(rùn)，可以吸附目標(biāo)化合物或干擾化合物。不同模式固相萃取小柱活化用的溶劑不同，其目的有2 個(gè)：一是除去填料中可能存在的雜質(zhì)；二是使填料溶劑化，提高固相萃取的重現(xiàn)性。

2. 上樣

將液態(tài)或溶解后的固態(tài)樣品倒入預(yù)處理后的SPE 柱，然后利用抽真空、加壓或離心的方法使樣品通過(guò)SPE柱，在該步驟中，分析物被保留在吸附劑上。

3. 淋洗和洗脫

樣品進(jìn)入SPE柱、目標(biāo)化合物被吸附后，視分離模式和樣品性質(zhì)而定，可采用適當(dāng)?shù)南疵搫⒛繕?biāo)化合物直接淋洗下來(lái)；也可先將干擾化合物淋洗掉，再用適當(dāng)?shù)南疵搫⒛繕?biāo)化合物洗脫，通常采用后一種方法更有利于樣品的凈化。淋洗和洗脫同上所述，可采用抽真空、加壓或離心的方法使淋洗液或洗脫液流過(guò)吸附劑。

固相萃取柱的尺寸選擇

理想的固相萃取柱類(lèi)型應(yīng)該是內(nèi)徑和長(zhǎng)度均較大。柱長(zhǎng)加大，相應(yīng)的塔板數(shù)則高，柱內(nèi)徑較大，進(jìn)樣后樣品的原點(diǎn)則小(反映在柱子上就是樣品層較薄)，分離度變大。缺點(diǎn)是采用內(nèi)徑較大的萃取柱需較多的硅膠和溶劑，增加實(shí)驗(yàn)成本?，F(xiàn)在常用萃取柱直徑與長(zhǎng)度比一般在1∶5～1∶10，固定相硅膠量是樣品量的30～40倍。萃取柱較短內(nèi)徑較小，相應(yīng)的塔板數(shù)則低，進(jìn)樣后樣品的原點(diǎn)則大(反映在柱子上就是樣品層較厚，樣品層在固相萃取柱內(nèi)小于0.5cm，各組分較容易完全分離)，分離度變小。

如果所需組分和雜質(zhì)分離度較大(所需組分分離度R>1)，使用硅膠較少、內(nèi)徑較小的萃取柱(例如200毫克的樣品，用2cm×20cm的柱子);如果所需組和雜質(zhì)分離度較小(所需組分分離度R<1)，可以加大萃取柱內(nèi)徑，也可使用極性較小的淋洗劑等。

固相萃取柱有哪些分類(lèi)

SPE固相萃取的核心在于填料，即吸附劑。根據(jù)吸附劑的不同，固相萃取柱可大致分為以下三類(lèi)：

1、正相固相萃取固定相（填料）：極性物質(zhì)。分離對(duì)象：極性、中等極性、非極性流動(dòng)相（洗脫劑）：非極性、中等極性吸附劑與化合物間作用力：氫鍵，π—π鍵等常用正相固相萃取柱：①極性官能團(tuán)鍵合硅膠如-CN，-NH2；②極性吸附物質(zhì)如Silica、Florisil、Alumina

2、反相固相萃取固定相：非極性分離對(duì)象：中等到非極性物質(zhì)流動(dòng)相：極性（水溶液）或中等極性吸附劑與化合物間作用力：范德華力或色散力常用反相固相萃取柱：十八烷基鍵合硅膠（C18柱）

3、離子交換固相萃取固定相：帶電荷物質(zhì)分離對(duì)象：帶電荷的化合物（水溶液、有機(jī)溶液）流動(dòng)相：去離子水、高或低離子強(qiáng)度溶液吸附劑與化合物間作用力：靜電吸引可分為兩種：①陰離子交換：脂肪族季銨類(lèi)鹽鍵合硅膠，如SAX、NH2；②陽(yáng)離子交換：磺酸基，如SCX，羧酸基團(tuán)如WCX