制備型液相色譜儀

制備型液相色譜儀通常都被認(rèn)為和大容量色譜柱和高流速有關(guān)聯(lián)的。然而并不是以設(shè)備的大小和系統(tǒng)消耗的流動相的多少來決定制備液相色譜，而是依據(jù)分離目的來決定。分析液相的目的是給一種組份進(jìn)行定量和定性。與傳統(tǒng)的純化方法比較，制備液相是一種更有效的分離方法，因此被廣泛應(yīng)用在樣品和產(chǎn)品的提取和純化上。

液相色譜是近30年發(fā)展起來的一種具有高靈敏度、高選擇性的快速分離分析技術(shù)。它既能用于微量組分的分析測定，又能用于大量的制備分離，靈活多樣，其應(yīng)用范圍已超過其他各種分離方法，尤其在中藥樣品的分析分離方面更充分發(fā)揮它的特長，為推動該領(lǐng)域的進(jìn)步和發(fā)展作出了巨大貢獻(xiàn)。

液相色譜的操作步驟

1).首先對流動相進(jìn)行過濾，根據(jù)需要選擇不同的濾膜，一般為有機(jī)系和水系，常用的孔徑為0.20um和0.45um。

2).對抽濾后的流動相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

3).正常情況下，儀器首先用甲醇沖洗10-20分鐘，然后再進(jìn)入測試用流動相(如流動相為緩沖試劑，則要二次重蒸水沖洗10-20分鐘，直至色譜柱中有機(jī)相沖凈為止)。

4).一般情況下，流動相沖洗20-30分鐘后，儀器方可穩(wěn)定，重要的是儀器基線走后，方可進(jìn)樣測試。

5).同時進(jìn)兩針標(biāo)樣，將其結(jié)果相比較，其結(jié)果的比值在0.98-1.02之間后，就可以正式進(jìn)行樣品的測試了。

6).樣品測試結(jié)束后，就要進(jìn)行色譜儀及色譜柱的清洗和維護(hù)。如流動相為緩沖試劑，同樣也要用重蒸水清洗10-20分鐘，方可用有機(jī)相進(jìn)行保護(hù)，否則，有損色譜柱。

7).關(guān)機(jī)時，先關(guān)計算機(jī)，再關(guān)液相色譜。

8).填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。

液相色譜的前世今生

早在古代羅馬時期，人們已知道將一滴含有混合色素的溶液滴在一塊布或一片紙上，通過觀察溶液展開產(chǎn)生的同心圓環(huán)來分析染料與色素。實(shí)際上，這種簡單操作已經(jīng)采用了現(xiàn)代色譜學(xué)的基本原理。

19世紀(jì)中葉，德國化學(xué)家Runge對古羅馬人的這種方法作了重要的改進(jìn)，使其具有良好的重現(xiàn)性與定量能力，使鹽溶液可在紙上分離；另外，化學(xué)家Goppalsr-oeder也在長條紙上分離了染料和動植物色素，這些研究標(biāo)志著紙色譜法的建立，并逐步發(fā)展成為現(xiàn)代色譜技術(shù)。

1903年，俄國植物學(xué)家Tswett在華沙自然科學(xué)學(xué)會生物學(xué)會會議上發(fā)表了題為“一種新型吸附現(xiàn)象及其在生化分析上的應(yīng)用”中，提出了應(yīng)用吸附原理分離植物色素的新方法，這一工作標(biāo)志著現(xiàn)代色譜學(xué)的開始。他將碳酸鈣裝入豎直的玻璃柱中，從頂端倒入植物色素的石油的醚浸取液，進(jìn)一步采用溶劑沖洗，使溶質(zhì)在柱的不同部位形成色帶，首先向人們公開展示了采用色譜法提純的植物色素溶液以及色譜圖顯示著彩色環(huán)帶的柱管。Tswett將這種方法命名為色譜，管內(nèi)填充物被稱之為固定相，沖洗劑被稱之為流動相。