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色譜柱的技術(shù)都有哪些?比如,封尾等,這些技術(shù)在應(yīng)用時(shí)都體現(xiàn)在哪里?
色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù),封尾技術(shù)和裝柱技術(shù)等,填料技術(shù)自不待言,填料的差異對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響,色譜填料的鍵合相密度的不同也會影響到填料表面硅羥基外露的多少,進(jìn)而影響填料的選擇性。封尾技術(shù)中用到的封尾試劑的差異也會對色譜柱的性質(zhì)產(chǎn)生很大的影響,如體現(xiàn)在色譜填料的pH耐受范圍,水相耐受范圍,極性強(qiáng)弱等。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡單,不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床,更多是一門藝術(shù),需要經(jīng)驗(yàn)積累。
液相色譜特點(diǎn)
①高壓:流動相為液體,流經(jīng)色譜柱時(shí),受到的阻力較大,為了能迅速通過色譜柱,必須對載液加高壓。
②高速:分析速度快、載液流速快,較經(jīng)典液體色譜法速度快得多,通常分析一個樣品在15~30分鐘,有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成,一般小于1小時(shí)。
③高:分離效能高??蛇x擇固定相和流動相以達(dá)到分離效果,比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
④高靈敏度:紫外檢測器可達(dá)0.01ng,進(jìn)樣量在μL數(shù)量級。
⑤應(yīng)用范圍廣:百分之七十以上的有機(jī)化合物可用液相色譜分析,特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析,顯示出優(yōu)勢。
⑥柱子可反復(fù)使用:用一根柱子可分離不同化合物
⑦樣品量少、容易回收:樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞,可以收集單一組分或做制備。此外液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn),但也有缺點(diǎn),與氣相色譜相比各有所長,相互補(bǔ)充。液相色譜的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測器之間,除了柱子以外的任何死空間(進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測池等)中,如果流動相的流型有變化,被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬,柱效率降低。液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。
液相色譜儀分類方法
1、按分離目的可分:實(shí)驗(yàn)室液相色譜儀和工業(yè)液相色譜儀。
2、按固定相物理狀態(tài)可分:液液色譜儀和液固色譜儀。
3、按色譜柱形狀可分:填充柱液相色譜儀和平板液相色譜儀。
4、按分離原理可分:吸附液相色譜儀、分配液相色譜儀、離子交換液相色譜儀和凝膠液相色譜儀。
注:①吸附色譜:利用固體吸附表面對不同組分物理吸附性能的差異達(dá)到分離的色譜。②分配色譜:利用不同的組分在兩相中有不同的分配系數(shù)以達(dá)到分離的色譜。③離子交換色譜:利用離子交換原理的達(dá)到分離的色譜。