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什么是液相色譜?
液相色譜(liquid chromatography,LC)是一種色譜技術(shù),用于分離和分析溶液中混合物的化學(xué)成分,以確定是否存在或不存在特定成分,如果存在,則存在多少。我們中的許多人會從上學(xué)開始就熟悉平面LC的形式,在濾紙上打上黑色墨水標(biāo)記,將一端浸入水中,然后觀察墨水中的成分顏色是否分開。但是,分析應(yīng)用中使用的大多數(shù)LC均基于柱色譜法,這將是本文的重點。顧名思義,液相色譜(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是使用高色譜分辨率進行分離的高的性能分析。分離的組分也可以在檢測后使用餾分收集器分離,作為純化的手段。HPLC有多種不同的配置,可用于分離分子量從半揮發(fā)性小分子到幾萬千道爾頓的大蛋白生物分子的溶解組分。液相色譜法是一種非常流行的分析技術(shù),廣泛用于環(huán)境監(jiān)控,農(nóng)業(yè)領(lǐng)域。
液相色譜的應(yīng)用
(1)分離混合物液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。通過與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,液相色譜法所達到的高分辨率和高靈敏度,可分離并同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì),能夠分離復(fù)雜混合物中的微量成分。并且隨著固定相的發(fā)展,還可在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成對其的分離。
(2)生化分析由于液相色譜法具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點,因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、藥的研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領(lǐng)域,并已成為解決生化分析問題有前途的方法。
(3)儀器聯(lián)用液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯多核芳烴等:液相色譜一紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快,如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類等.使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。
液相色譜儀分類方法
1、按分離目的可分:實驗室液相色譜儀和工業(yè)液相色譜儀。
2、按固定相物理狀態(tài)可分:液液色譜儀和液固色譜儀。
3、按色譜柱形狀可分:填充柱液相色譜儀和平板液相色譜儀。
4、按分離原理可分:吸附液相色譜儀、分配液相色譜儀、離子交換液相色譜儀和凝膠液相色譜儀。
注:①吸附色譜:利用固體吸附表面對不同組分物理吸附性能的差異達到分離的色譜。②分配色譜:利用不同的組分在兩相中有不同的分配系數(shù)以達到分離的色譜。③離子交換色譜:利用離子交換原理的達到分離的色譜。