高壓液相色譜

這是指柱壓一般大于20bar（或300psi）的“高壓(或高效)液相色譜”，通常指所用色譜柱的塔板數(shù)大于2000，一般是在2000～20000的范圍之間。

當需要從大量的物質(zhì)中分離純化不足1％的所需成分時，分離工作將會十分困難，往往在純化的后面階段需要使用10μm或更小顆粒的高效填料。為獲得所需微量組分，可采用如下分離手段：制備型分離→半制備型分離→分析型分離→產(chǎn)物。為提高每次分離獲得純品的數(shù)量，制備型高壓液相色譜分離通常在超載情況下運行。

高壓液相色譜，即目前常用的高效液相色譜。色譜柱內(nèi)填裝的是粒度范圍較窄的微小顆粒固定相(3～30μm)，為使流動相流出，需采用較高的壓力，同時系統(tǒng)的復雜性及成本亦增大，但分辨率可得到較大的提高。而填裝較大顆粒的固定相時，如中壓液相色譜系統(tǒng)，裝柱較容易，柱的通透性較高(只需較低的泵壓力)，可采用更大的色譜柱和更經(jīng)濟的儀器，由此分辨率也較低。

高效液相色譜儀流動相(MOBLLE PHASE)的問題

1、流動相的過濾。

配制好的流動相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因為溶液中含有很多肉眼難以發(fā)現(xiàn)的微小顆粒，如果不把它們?yōu)V除掉，就會堵塞泵口、柱頭上的過濾器，這樣就堵塞了流動相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。碰到這種情況時，要換用經(jīng)過濾的流動相，并將堵塞的濾器拆下來浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機清洗20分鐘，以除去濾片上的堵塞物。

2、流動相的脫氣。

流動相在使用前必須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動相中的氣體，否則，這些氣體會使柱填料的性能降低，還能夠?qū)z測器的信號產(chǎn)生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮氣脫氣等。真空脫氣法和氮氣流脫氣法是目前常用的脫氣法。水和甲醇混合后會產(chǎn)生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會進入色譜柱和檢測器，并將影響分析工作的正常進行。

高效液相色譜基本原理

液相色譜根據(jù)分離機理的不同可分為：

?液固吸附色譜

?液液分配色譜

?離子交換色譜

?離子對色譜法

?分子排阻色譜(或凝膠滲透色譜)

（一）液-固吸附色譜

流動相為液體，固定相為固體吸附劑，根據(jù)物質(zhì)吸附作用的不同來分離物質(zhì)。

（二）液-液分配色譜

流動相和固定相都是液體的色譜法即為液-液色譜，是利用樣品組分在兩種不相溶的液相間的分配來進行分離。一種液相為流動相，另一種是涂于載體上的固定相。

流動相極性小于固定相極性的液-液色譜法稱為正相分配色譜法。

流動相極性大于固定相極性的液-液色譜法稱為反相分配色譜法。

（三）離子交換色譜

（四）離子對色譜法

（五）分子排阻色譜法