液相色譜的分離過程

同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。

開始樣品加在柱頭上，假設(shè)樣品中含有3個(gè)組分，A、B和C，隨流動(dòng)相一起進(jìn)入色譜柱，開始在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行分配。分配系數(shù)小的組分A不易被固定相阻留，較早地流出色譜柱。分配系數(shù)大的組分C在固定相上滯留時(shí)間長，較晚流出色譜柱。組分B的分配系數(shù)介于A，C之間，第二個(gè)流出色譜柱。若一個(gè)含有多個(gè)組分的混合物進(jìn)入系統(tǒng)，則混合物中各組分按其在兩相間分配系數(shù)的不同先后流出色譜柱，達(dá)到分離之目的。

不同組分在色譜過程中的分離情況，首先取決于各組分在兩相間的分配系數(shù)、吸附能力、親和力等是否有差異，這是熱力學(xué)平衡問題，也是分離的首要條件。

其次，當(dāng)不同組分在色譜柱中運(yùn)動(dòng)時(shí)，譜帶隨柱長展寬，分離情況與兩相之間的擴(kuò)散系數(shù)、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動(dòng)相的流速等有關(guān)。所以分離效果則是熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)兩方面的綜合效益。

　液相色譜基本功能為

1、六種定量計(jì)算方法:歸一法、修正歸一法、帶比例因子的修正歸一法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法及指數(shù)計(jì)算法.　　

2、校準(zhǔn)運(yùn)行:能夠?qū)崿F(xiàn)使用多種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)試樣進(jìn)行校準(zhǔn),建立樣品濃度──面積校正曲線.　　

3、靈活的峰識(shí)別和處理能力:可以通過設(shè)置峰處理參數(shù)和時(shí)間程序識(shí)別色譜峰的處理,也可以用人工方式進(jìn)行處理.　　

4、色譜圖形、設(shè)定的定量計(jì)算方式、峰處理參數(shù)及峰鑒定表等可以保存到用戶自命名的文件中.

色譜柱的技術(shù)都有哪些？比如，封尾等，這些技術(shù)在應(yīng)用時(shí)都體現(xiàn)在哪里？

色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)，封尾技術(shù)和裝柱技術(shù)等，填料技術(shù)自不待言，填料的差異對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響，色譜填料的鍵合相密度的不同也會(huì)影響到填料表面硅羥基外露的多少，進(jìn)而影響填料的選擇性。封尾技術(shù)中用到的封尾試劑的差異也會(huì)對色譜柱的性質(zhì)產(chǎn)生很大的影響，如體現(xiàn)在色譜填料的pH耐受范圍，水相耐受范圍，極性強(qiáng)弱等。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床，更多是一門藝術(shù)，需要經(jīng)驗(yàn)積累。

液相色譜儀的構(gòu)造

液相色譜系統(tǒng)主要由流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器和記錄儀組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。液相色譜的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn)，進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利、切換嚴(yán)密。同時(shí)，由于液體流動(dòng)相黏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氣體，為了減低柱壓，液相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱。