第yi代腺病毒載體：一般將E1或E3基因缺失的腺病毒載體稱為第yi代腺病毒載體，此類型載體在未經(jīng)過純化時可引發(fā)機體產(chǎn)生較強的炎1癥反應(yīng)和免1疫反應(yīng)，純化后可以安全使用，體內(nèi)表達周期可達4周。

第二代腺病毒載體：E2A或E4基因缺失的腺病毒載體被稱為第二代腺病毒載體，產(chǎn)生的免1疫反應(yīng)較弱其載體容量和安全性方面有所改進，但病毒包裝難度和出毒和病毒滴度下降厲害，應(yīng)用相當(dāng)局限。

第三代腺病毒載體：第三代載體缺失了全部的（無病毒載體，gutless vector）或大部分腺病毒基因（微型腺病毒載體，mini Ad），僅可保留ITR和包裝信號序列。第三代腺病毒載體zui大可插入35kb的基因，病毒蛋白表達引起的細胞免1疫反應(yīng)進一步減少，載體中引入核基質(zhì)附著區(qū)基因可使得外源基因保持長期表達，并增加了載體的穩(wěn)定性。這一載體系統(tǒng)需要一個腺病毒突變體作為輔助病毒。

腺病毒是無胞膜的線性雙鏈DNA病毒，目前腺病毒科分為5個屬，有多種型別的腺病毒已經(jīng)被開發(fā)為基因轉(zhuǎn)移載體，在基礎(chǔ)科研、基因cure和載體疫1苗領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。

腺病毒的基因組長約26-46kb，這使得腺病毒載體的構(gòu)建與常見質(zhì)粒載體(一般長度小于10kb)不同。太長的基因組使得在腺病毒載體上富集一個多克1隆位點非常困難。針對重組腺病毒的構(gòu)建，開發(fā)了多種方法。

目前已有的腺病毒載體系統(tǒng)均存在缺陷，有些構(gòu)建步驟繁瑣，耗時較長，有些在重組病毒中引入了不必要的外源序列，有些不能用于重組腺病毒的反向遺傳改造。近年來，新的生物特性不同的腺病毒不斷被發(fā)現(xiàn)，因此，本領(lǐng)域?qū)?gòu)建過程更加快捷簡便的、人工改造更加方便靈活的腺病毒載體系統(tǒng)和重組病毒構(gòu)建方法存在需求。

腺病毒呈無囊膜的球形結(jié)構(gòu),其病毒粒子在感1染的細胞核內(nèi)常呈晶格狀排列,每個病毒顆粒包含一個36 kb的線性雙鏈DNA,兩端各有一個100~600 bp的反向末端重復(fù)序列(inverted terminal re-pea,t ITR), ITR的內(nèi)側(cè)為病毒包裝信號,是病毒包裝所需要的順式作用元件?；蚪M包含早期表達的與腺病毒copy相關(guān)的E1~E4基因和晚期表達的與腺病毒顆粒組裝相關(guān)的L1~L5基因。

線狀雙股DNA與核心蛋白形成直徑為60~65 nm的髓芯,被包裹于衣殼內(nèi)。衣殼呈二十面體對稱,由252個直徑8~10 nm的殼粒組成,殼粒排列在三角形的面上,每邊6個,其中240個為六鄰體(非頂點殼粒) ,另12個為五鄰體基底(頂點殼粒)。每個六鄰體是六鄰體蛋白的同源三聚體,三聚體的六鄰體分子有一個三角形的塔尖和五面體的基底,塔區(qū)由4個環(huán)構(gòu)成即loop1、loop2、loop3、loop4,基底包含兩個區(qū)域P1、P2區(qū)[3]。六鄰體上的表位(epitope)是診斷不同血1清型的標(biāo)準(zhǔn),它包括哺乳動物腺病毒屬的抗原成分,是病毒體對免1疫選擇壓力zui敏感的部位。

每個五鄰體基底上結(jié)合著1根(哺乳動物腺病毒)或2根(禽腺病毒)長9~77. 5 nm的纖維突起,這些纖維以五鄰體蛋白為基底由衣殼面伸出,纖維頂端形成頭節(jié)區(qū),纖突有血1清特異性,且含有負責(zé)體外血細胞凝集的種屬特異性抗原決定位點。

PCR核酸檢測實驗室布局建設(shè)

核酸檢測前的生物安全防護（工作人員個人三級防護的穿戴）

1、穿戴流程：在基因擴增實驗室的清潔區(qū)（更衣區(qū)）或者普通實驗室的潔凈區(qū)，工作人員按順序依次穿戴好一次性帽子、醫(yī)1用N95口罩、一次性防護服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防護目鏡和雙層乳膠手套，進入樣本處理工作區(qū)域或?qū)嶒炇摇?

2、要點提示：

2.1、具備標(biāo)準(zhǔn)基因擴增布局條件的實驗室，應(yīng)在清潔更衣區(qū)做好個人三級防護，條件有限的實驗室亦可選擇在一潔凈的實驗室中按流程穿戴好個人三級防護。

2.2、需佩戴醫(yī)1用N95口罩，若無醫(yī)1用N95口罩，可以考慮用普通N95/KN95口罩外加一次性外1科口罩的組合方式，但不要佩戴有呼吸閥的N95口罩。

2.3、佩戴N95口罩時需檢查密閉性，通過雙手按壓、深呼吸、左右轉(zhuǎn)頭等動作嚴(yán)格檢查口罩是否佩戴正確。

2.4、一次性防護服已具備新型冠狀病毒核酸檢測的防護需求，有條件時可以考慮加穿一次性反穿隔離衣，穿衣時需由他人協(xié)助。

2.5、穿戴整齊的工作人員，應(yīng)按要求盡快進入樣本處理的實驗區(qū)域開展工作，嚴(yán)禁穿戴三級防護后再進入普通實驗區(qū)域或辦公區(qū)域。