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武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。原位雜交對照試驗(yàn)同組織化學(xué)染色對照一樣,為證明原位雜交實(shí)驗(yàn)操作的準(zhǔn)確性和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的特異性,需要設(shè)置一系列對照實(shí)驗(yàn),具體的各種對照實(shí)驗(yàn)的設(shè)置及其意義請參考原位雜交專著,以下僅介紹幾種常用的對照實(shí)驗(yàn)。
預(yù)雜交1)每個(gè)管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘,避免振蕩。2)用等體積的HYB 取代HYB-。3)60℃水浴,預(yù)雜交4小時(shí)以上。
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺。熒光原位雜交是近年來發(fā)展起來的檢測染色體異常的新型技術(shù),在產(chǎn)前診斷中也得到了廣泛的應(yīng)用,成為傳統(tǒng)細(xì)胞遺傳學(xué)檢測的一種重要補(bǔ)充。本文著重介紹了FISH技術(shù)的原理及探針的分類,FISH技術(shù)在染色體病產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用及前景。
切片及細(xì)胞標(biāo)本的制備
載玻片的處理 因?yàn)樵浑s交一般在載玻片上進(jìn)行,所以載玻片必須保持清潔且不能有任何核酸酶的污染。4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。一般載玻片可先經(jīng)洗衣粉浸泡過夜,用流水沖洗、酸中浸泡4~8h,再用流水沖洗,雙蒸水洗2~3次。在160℃烤箱中烘烤2~4h。亦可經(jīng)15磅高壓滅菌20min處理,可將載玻片上的核酸酶消除。
(簡稱原位雜交,in situ hybridization histochemistry;ISHH)屬于分子雜交的一種,是一種應(yīng)用標(biāo)記探針與組織細(xì)胞中的待測核酸雜交,再應(yīng)用標(biāo)記物相關(guān)的檢測系統(tǒng),在核酸原有的位置將其顯示出來的一種檢測技術(shù)。1)將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復(fù)使用十次左右)。原位雜交的本質(zhì)就是在一定的溫度和離子濃度下,使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補(bǔ)規(guī)則與組織細(xì)胞內(nèi)待測的核酸復(fù)性結(jié)合而使得組織細(xì)胞中的特異性核酸得到定位,并通過探針上所標(biāo)記的檢測系統(tǒng)將其在核酸的原有位置上顯示出來。