熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH）是一種分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期發(fā)展起來的一種非放6射性原位雜交技術。目前這項技術已經(jīng)廣泛應用于動植物基因組結構研究、染色體結構變異分析、病毒感5染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫5瘤遺傳學和基因組進化研究等許多領域。FISH的基本原理是用熒光標記的單鏈核酸為探針，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行特異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸?？捎脽晒鈽擞浀奶结樦苯优c染色體進行雜交從而對基因進行染色體定位。



原位雜交技術應用于染色體、細胞和組織切片等樣品中進行核酸特異性檢測，與免6疫組化技術的結合應用，能將DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓撲信息結合起來。1969年Pardue和Gall將放9射性標記的探針直接應用于純化核酸的雜交，此后得益于分子克6隆技術的發(fā)展，及不同探針標記系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)的應用，大大增加了原位雜交檢測的應用靈活性和檢測靈敏度。

原位雜交中探針的選擇

DNA探針、RNA探針和寡核苷酸探針均能通過不同的酶促分子反應進行標記。寡核苷酸探針的長度較短，因此避免了探針內(nèi)部退火的問題，在雜交時的滲透能力也更好，探針與靶標的接觸這是影響原位雜交是否成功的重要因素之一。DNA探針、RNA探針在合成時需要控制探針片段長度，通常300-1000bp左右，能覆蓋到較長片段的靶核酸序列，增加檢測的靈敏度。

另一種多聚體促進劑是聚丙0烯0酸，用其鈉鹽，濃度為2%～4%。與硫酸葡聚糖相比，其優(yōu)點是價格低廉，粘度低（MW=90 000）。小分子化學試劑酚和Guandine thiocyanate也能促進雜交，它們可能是通過增加水的疏水性和降低雙鏈和單鏈DNA間的能量差異而發(fā)揮作用。酚作為雜交促進劑，只能在低DNA濃度的液相雜交中觀察到，該方法曾被稱為酚乳化復性技術，該法不能用于固相雜交，因酚可引起核酸與膜的非特異吸附作用，即使在液相雜交中的應用也是有限的。而Guandine thiocyanate可通過降低雙鏈DNA的Tm值而起作用。此外，該分子還可以促進RNA的雜交，有裂解細胞而抑制RNase的作用?？傊?，硫酸葡聚糖和聚乙二醇因能用于固相雜交是目前zui常用的雜交促進劑。