現(xiàn)有的細胞培養(yǎng)基質(zhì)膠的應(yīng)用中會碰到哪些問題？

1）Matrigel（基質(zhì)凝膠）很難處理, 只能在低溫條件下溶解, 而且，不同批次間的產(chǎn)品在性能上、品質(zhì)上會有不同，即使來自同一個廠家也不可避免;

2）相對來說，建立的微環(huán)境并不十分穩(wěn)定, 較佳培養(yǎng)時間一般不會超過5天，且售價并不便宜；

3）重組層粘連蛋白和纖連蛋白僅適用于某些類型的細胞, 非常不穩(wěn)定且昂貴;

4）聚鳥氨酸通常與層粘連蛋白結(jié)合使用, 主要限于神經(jīng)元細胞。

       細胞培養(yǎng)基質(zhì)膠（凝膠、基質(zhì)凝膠）PD.即PhenoDrive，目前，該系列產(chǎn)品已經(jīng)被已成功用于一系列細胞的單一培養(yǎng)和共培養(yǎng)中。⑤靜電紡納米纖維具有較高的比表面積和孔隙率，可增大傳感材料與被檢測物的作用區(qū)域，有望大幅度提高傳感器性能。每種PhenoDrive產(chǎn)品都經(jīng)過專門設(shè)計，可以模擬適當(dāng)細胞表型和功能所必需的細胞外基質(zhì)的單獨成分，或者操縱細胞生長的周圍環(huán)境以提供模仿體內(nèi)觀察到的環(huán)境。每個PhenoDrive的定制設(shè)計允許將其生物提示呈現(xiàn)給細胞以確保大效果。

       PHENODRIVE是一類合成的仿生細胞基質(zhì), 能夠通過細胞外基質(zhì)的特定生物配體, 對大多數(shù)細胞維持或影響其表型, 可用于細胞單培養(yǎng)或共培養(yǎng)。通過重組后的PHENODRIVE可以:

       1 在2D培養(yǎng)耗材如培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶的表面形成一層透明的薄膜;

       2 對于懸浮細胞培養(yǎng), 以通過將PHENODRIVE直接溶解在培養(yǎng)液中;

無論上面哪一種應(yīng)用方式, 細胞均可以在較短的時間內(nèi)形成類組織樣結(jié)構(gòu)。

PHENODRIVE凍干粉末的使用方法：

       與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基質(zhì)膠相比, 我們的合成基質(zhì)膠使用過程極為簡單, 在室溫下即可實現(xiàn)重組使用, 這里就 PHENODRIVE的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用流程介紹如下:

       由于PHENODRIVE 是以無菌凍干粉末狀態(tài)進行存儲的, 因此在使用時需要對其進行重組。該裝置采用了靜電紡絲控制參數(shù)，包括聚合物溶液的注入速度、工作距離、集氣管轉(zhuǎn)速、工作溫度文章來自于：genintech。實驗人員可以根據(jù)需求,取適量的粉末將其溶解進水、乙醇或培養(yǎng)液中, 這個過程非常簡單, 待其溶解后得到無色、透明液體經(jīng)過濾后即可準(zhǔn)備用于培養(yǎng) , 這一過程即重組。重組后的液體可在-20℃ 的低溫下保存3至少3個月。

       對于這類耗材表面的涂布應(yīng)用, 通常建議將PHENODRIVE 凍干粉末溶解進75% 的乙醇中, 按要求的濃度進行重組, 將經(jīng)過濾的重組溶液澆鑄在需要涂布的器皿表面,并在無菌的環(huán)境下讓其自然蒸發(fā)（建議紫外線照射的無菌環(huán)境下）, 待溶劑蒸發(fā)盡后, 即在器皿表面留下一層透明的薄膜,即完成涂布的過程?？刂栖浖?通過與系統(tǒng)適配的控制軟件（通過USB端口連接），可對靜電紡絲納米纖維產(chǎn)品的多種參數(shù)進行控制。

建議：在無情況下種植細胞, 待細胞粘附后再添加, 比如在細胞種植3小小時后。

       如果采用乙醇溶液進行重組, 應(yīng)確保所使用的聚合物支架不溶于乙醇 。按照粉末重組步驟, 然后用移液器移取足夠的重組溶液將支架完全覆蓋, 同樣采用自然蒸發(fā)的方法在支架的表面及空期間形成一層透明的薄膜。

       溶解待培養(yǎng)細胞類型的無組織培養(yǎng)基中的PHENODRIVE, 方法是按照粉末步驟配置適當(dāng)濃度的重組透明重組溶液,再將從組后的溶液與細胞懸浮液混合, 以達到0.001% ~1%（V/V）的終 PHENODRIVE 濃度。靜電霧化與靜電紡絲的區(qū)別在于二者采用的工作介質(zhì)不同，靜電霧化采用的是低粘度的牛頓流體，而靜電紡絲采用的是較高粘度的非牛頓流體。細胞懸浮液的典型細胞濃度是40000個/ml ~1000000個/ml。