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三羥(Tris)作為一種常用的生物緩沖劑,因它的結(jié)構(gòu)簡單,反而有活性,易于參與反應(yīng),所以我們可以通過它的分子結(jié)構(gòu)制備出與它相關(guān)的產(chǎn)品。如Bis-Tris, Tricine,TES,TAPS等均為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常使用的緩沖劑,它們的分子結(jié)構(gòu)中都含有Tris的分子結(jié)構(gòu)。它也常被用作RNA雜交和DNA裂解的緩沖液。在Tris的使用中,需要注意:Tris緩沖液的pH值受溫度和濃度影響很大,因此在配制過程中要考慮使用環(huán)境。且來看看它在Bis-Tris, Tricine,TES,TAPS中如何發(fā)揮它的潛能的。
Tris通常被用于核酸DNA或RNA的瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液,通常用的緩沖體系有TAE、TBE、TPE等,即生物緩沖劑Tris配合EDTA以及醋酸、硼酸、磷酸等配制成的緩沖溶液。不同公司使用的緩沖液有所差異,相對來說使用磷酸的TPE較少,主要是使用TAE和TBE緩沖液。在做核酸瓊脂糖凝膠電泳時,首先的準(zhǔn)備工作就是制備凝膠,瓊脂糖凝膠做的好壞直接影響電泳效果和效率。這個制作過程耗時較長,節(jié)約時間考慮也可以直接購買制備好的預(yù)制凝膠。
生物緩沖液Tris是一種氨基獨(dú)一不含鈉的氨基緩沖堿,不會給體系中帶入鈉、鉀離子,不影響滲透壓,必要時也可以加入生理鹽水調(diào)節(jié)鹽平衡。其對生物化學(xué)過程的影響很小,也不會與鈣、酶及重金屬離子生成沉淀,不影響激酶、磷酸酶、脫氫酶等多種酶的活性。通常用于DNA、RNA及蛋白質(zhì)相關(guān)的實(shí)驗(yàn),常用緩沖體系有:Tris-HCl緩沖液、TBS緩沖液、TE緩沖液、TAE緩沖液、TBE緩沖液、Tris甘氨酸緩沖液、Tris磷酸緩沖液等。需要注意的是Tris的pH值受溫度影響較大,要注意控制好溫度;Tris溶液顯堿性,會吸收CO2,要注意密封。