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細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一,它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一種分子量為35-36 KD的Ca2 依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)高親和力特異性結(jié)合。以融合蛋白Annexin Ⅴ-EGFP作為熒光探針,利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
儀器用水是使用好檢驗(yàn)試劑的一個(gè)十分重要的環(huán)節(jié)之一。因?yàn)闇y定離子類項(xiàng)目:比如銅、鐵、鋅、鈣、鎂、磷。
這些項(xiàng)目在使用過程中,儀器用水的質(zhì)量相當(dāng)重要,雖然現(xiàn)在一般醫(yī)院的生化儀都有制水系統(tǒng),但制水系統(tǒng)基本都是制備去離子水,離子交換樹脂在使用一段時(shí)間后交換能力明顯下降,需要定期進(jìn)行更換,否則制備的水離子含量多,電導(dǎo)率偏高。使用含離子超標(biāo)的水沖洗儀器,直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。再如血氨、二氧化碳項(xiàng)目,如果水質(zhì)不好,儀器用水中本身含氨和二氧化碳就很高,則檢驗(yàn)該項(xiàng)目的結(jié)果也會(huì)受到嚴(yán)重的影響。
就是具有自動(dòng)清洗程序的全自動(dòng)生化分析儀也有交叉污染,例如Beckman 全自動(dòng)生化分析儀CX4,它的試劑針(probe)、樣品吸樣針及反應(yīng)攪拌棒是利用高壓沖洗洗液沖洗,然后用高壓壓縮空氣吹干,有時(shí)由于洗液壓力和壓縮空氣壓力偏低,使試劑吸針、樣品針及反應(yīng)攪拌棒沖洗不干凈、吹不干,從而導(dǎo)致反應(yīng)池之間相互污染、試劑間交叉污染,是檢驗(yàn)結(jié)果偏離。另一個(gè)值得注意的問題是許多生化儀器由于長期頻繁的利用,使加樣針和試劑針的磨損加重或的“特氟龍”吸頭不及時(shí)更換,使吸樣針或試劑針密封層增大,產(chǎn)生泄露現(xiàn)象也是造成樣本間及實(shí)際間項(xiàng)目污染的一個(gè)重要原因。
現(xiàn)代化分析儀上通常有分析程序供用戶設(shè)定,包括樣品量、試劑量、波長、分析方式和延遲時(shí)間、測試時(shí)間的設(shè)定等。下面我們就延遲時(shí)間和加樣程序的設(shè)定來說明正確使用分析參數(shù)對(duì)于正確運(yùn)用試劑的作用,比如肌酐測定法,我們?cè)谠O(shè)定延遲時(shí)間應(yīng)注意到在堿性條件下50秒前首先快速與乙酰等快速反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生紅色化合物,而在120秒后堿性又能與慢反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生陽性干擾,解決辦法:好設(shè)定延遲時(shí)間為50-60秒之間。