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在眾多的生物實驗室,分子生物學(xué)檢測方法如PCR因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢已經(jīng)被廣泛應(yīng)用,不過正是由于它靈敏度極高,微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測結(jié)果的假陽性,所以對環(huán)境污染的控制也極為嚴(yán)格。面對眾多的污染源,比如樣本交叉污染、試劑儀器交叉污染、質(zhì)粒污染、PCR擴增產(chǎn)物污染、還有極容易忽視的氣溶膠污染,氣溶膠是由固體或液體小質(zhì)點分散并懸浮在氣體介質(zhì)中形成的膠體分散體系,在空氣與液體面摩擦?xí)r,比如在操作時比較劇烈地?fù)u動反應(yīng)管,開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。據(jù)計算一個氣溶膠顆??珊?8000拷貝,因而由其造成的污染是一個非常重要而被忽視的污染源。
2.原則上PCR檢驗實驗室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域:試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。根據(jù)使用儀器的功能,區(qū)域可適當(dāng)合并。若使用實時熒光定量PCR儀且不需要進行后續(xù)產(chǎn)物分析工作,擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。若使用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀,則標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。
對于一些不常用的試劑,管理人員要定時檢查,以保證試劑包裝完好、標(biāo)簽完整、字跡清楚。固體試劑應(yīng)無吸濕、潮解現(xiàn)象;液體試劑應(yīng)無沉淀物,否則,就應(yīng)檢查試劑的密封情況。某些試劑要進行特別認(rèn)真的檢查,如鉀、鈉表面的油封,白磷、表面的水封是否符合要求,以免發(fā)生危險?;瘜W(xué)試劑的質(zhì)量是直接影響實驗質(zhì)量的因素之一,管理人員應(yīng)有一定的試劑質(zhì)量判斷知識。
首先從用電設(shè)施上說起,電源插座必須接地線,大功率儀器、電器設(shè)備必須接空氣開關(guān),實驗室整個用電必須有漏電保護開關(guān);
當(dāng)可能發(fā)生交叉污染的兩種操作必須在同一區(qū)域進行時,可以在時間上將兩種操作分開。比如,由于實驗室面積所限,必須在同一個無菌室中進行樣品處理接種和菌的鑒定 工作,那么就只能將兩種操作分別安排在上、下午,并在兩種工作交接的時候?qū)o菌室進行 徹底的消毒處理。這種對不同操作進行時間上隔離是一種“不得以而為之”的補救辦法,在設(shè)計實驗室的時候還是在空間上隔離可能存在交叉污染的不同操作。