Elisa試劑盒——Elisa實(shí)驗(yàn)常見問題及解決方案

顯色淡，靈敏度偏低

1  試劑盒未充分平衡 試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）

2  樣品不適合做ELISA檢測 樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優(yōu)化檢測的條件（例如稀釋液的成分）

3  酶標(biāo)板在貯存或洗后拍干時(shí)過分干燥 防止板過于干燥

4  包被遭到破壞 操作溫和，移液槍不能碰到孔底

5  樣本和孵育條件不合適 按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育。

6  洗滌浸泡時(shí)間過長 按照說明書操作。勿人為增加浸泡時(shí)間；

7  偶聯(lián)HRP試劑污染 棄去試劑，重新配置

8  錯(cuò)誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑 棄去試劑，重新配置

9  TMB底物孵育時(shí)間過短，因非人為因素影響，需要優(yōu)化孵育時(shí)間 確定合適的孵育時(shí)間：人為判定-高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)深藍(lán)色；S4-5有淡藍(lán)色；機(jī)器判定620 nm波長下測定OD值達(dá)到0.6-0.65

10  樣本濃度過高或存在基質(zhì)效應(yīng) 建議做不同稀釋倍數(shù)，確認(rèn)樣本稀釋倍數(shù)。

11  濾光片設(shè)置有問題或者波長選擇不對(duì) 確認(rèn)儀器設(shè)置及選擇正確的波長檢測。

12  酶標(biāo)板不適合做ELISA 不能使用細(xì)胞培養(yǎng)板，建議使用ELISA高吸附力板子。

不正常的標(biāo)準(zhǔn)曲線

1  錯(cuò)誤的方法重懸標(biāo)準(zhǔn)品  加入正確量的溶液重懸標(biāo)準(zhǔn)品，重懸充分

2  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤  按照說明書要求稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

3  標(biāo)準(zhǔn)品污染  使用一次性的滅菌吸頭， 標(biāo)準(zhǔn)品貯存于2-8 ℃

4  錯(cuò)誤的倍比稀釋步驟  按照說明書倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

5  波長選擇錯(cuò)誤 TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而 前者比色波長為450nm，后者為492nm。雙波長比色分析優(yōu)于單波長。

6  標(biāo)準(zhǔn)品混用  不同批號(hào)試劑勿混用

7  試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長，溫度太高，標(biāo)準(zhǔn)品失活  盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫

8  ELISA未終止而直接檢測450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測，否則會(huì)出現(xiàn)620nm比450nm讀數(shù)高的現(xiàn)象。（數(shù)值仍有梯度規(guī)律）

ELISA試劑盒-ELISA檢測原理介紹

酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或結(jié)合到聚乙烯等固相載體上，利用抗原結(jié)合專一性進(jìn)行反應(yīng)的定性和定量檢測方法。它是應(yīng)用比較多的一種酶技術(shù)。ELISA試劑盒（ELISAKits）已成為藥品和植物病理學(xué)研究中的常用診斷工具，是檢測組織提取液和細(xì)胞培養(yǎng)液中目標(biāo)/抗原的理想工具，也是重要的質(zhì)量控制手段。