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原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進行雜交,從而對特定核酸順序進行精0準(zhǔn)確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進行。
原位雜交(in situ hybridization)將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進行雜交,稱為原位雜交。
使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置。
原位雜交;原位雜交(in situ hybridization)將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進行雜交,稱為原位雜交!
使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置。
以菌落原位雜交為例:對分散在若干個瓊脂平板上的少數(shù)菌落(100-200)進行克8隆篩選時,可采用本方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張硝5酸纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時間后,對菌落進行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。
多種探針標(biāo)記檢測系統(tǒng)
基于地高3辛、生物素和熒光標(biāo)記分子的標(biāo)記和檢測系統(tǒng)是常見的原位雜交檢測方法。
熒光標(biāo)記檢測常為直接探針標(biāo)記方法,如在dUTP/UTP/ddUTP上連接Fluorescein后進行核酸標(biāo)記。由于標(biāo)記在核酸上的熒光分子必須經(jīng)受雜交和洗脫過程中的考驗,以及熒光分子易于衰減,其檢測靈敏度受到一定的影響。但對熒光分子的直接檢測呈現(xiàn)的背景較低。