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電泳儀
凝膠電泳被廣泛用于分子生物學(xué)、遺傳學(xué)和生物化學(xué):1.大的DNA或者RNA分子通常利用瓊脂糖凝膠電泳(agarose gel electrophoresis)分離,也可以使用聚酰胺凝膠電泳(PAGE)。2.蛋白質(zhì)的凝膠電泳通常在加入聚酰胺凝膠中進(jìn)行(SDS-PAGE),或者非變性凝膠電泳,或二維電泳。 SDS-PAGE 蛋白質(zhì)凝膠電泳圖。一次去一個實驗室,里面全是進(jìn)口的儀器,我問他怎么沒用國產(chǎn)的,實驗員說了一句:國產(chǎn)的沒好的。 3.毛細(xì)管電泳 4.酶譜法(zymography) 5.變性梯度膠凝電泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,DGGE) 瓊脂糖和聚酰胺可以制成各種形狀、大小和孔隙度。瓊脂糖凝膠分離DNA片度大小范圍較廣,不同濃度瓊脂糖凝膠可分離長度從200bp至近50kb的DNA片段。瓊脂糖通常用水平裝置在強(qiáng)度和方向恒定的電場下電泳。聚酰胺分離小片段DNA(5-500bp)效果較好,其分辯力極高,甚至相差1bp的DNA片段就能分開。聚酰胺凝膠電泳很快,可容納相對大量的DNA,但制備和操作比瓊脂糖凝膠困難。聚酰胺凝膠采用垂直裝置進(jìn)行電泳。目前,一般實驗室多用瓊脂糖水平平板凝膠電泳裝置進(jìn)行DNA電泳。
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電泳儀常見問題及處理方案
電泳儀的輸出達(dá)不到設(shè)定值
電泳儀的輸出值狀態(tài)遵循“歐姆定律”:電壓U=電流I×(電泳槽)電阻R
電阻R相對不變的情況下,U、I、P(功率P=電流I×電壓U)中任意1個參數(shù)恒定,其他參數(shù)也隨之恒定;而任意1個參數(shù)變化,其他參數(shù)也隨之正比變化。
如果電泳儀的輸出電壓U達(dá)不到預(yù)置值,應(yīng)首先觀察I或P是否已經(jīng)恒定,或者已經(jīng)達(dá)到電泳儀所規(guī)定的大I或P(JY電泳儀均有明確指示燈標(biāo)志)。如果尚未達(dá)到極限值,將已經(jīng)恒定I或P的設(shè)置調(diào)大,才能夠提高電壓輸出。
如果電泳儀的電流I達(dá)不到預(yù)置值,可調(diào)整電壓U或功率P。如果電泳儀的功率P達(dá)不到預(yù)置值,可調(diào)整電壓U或電流I。
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電泳儀于1937年研發(fā),常用支持物體有濾紙、醋酸纖維薄膜等。在香蕉插座處暴露的銅線(當(dāng)試圖移除插座時由拉動線而不是插孔引起)。電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類,自由界面電泳不需支持物,如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等,這類電泳目前已很少使用。
原理
區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物,常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等,分子生物學(xué)領(lǐng)域中常用的是瓊脂糖凝膠電泳。采用寬溫域材質(zhì)聚碳酸脂注塑成型,有效避免電泳過程中冷熱交替造成的槽體開裂2。所謂電泳,是指帶電粒子在電場中的運動,不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同,因此在電場中運動速度不同,根據(jù)這一特征,應(yīng)用電泳法便可以對不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析,或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M(jìn)行組份分析或單個組份提取制備,這在臨床檢驗或?qū)嶒炑芯恐芯哂袠O其重要的意義。電泳儀正是基于上述原理設(shè)計制造的。
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電泳儀注意事項
1.電泳儀/電泳槽通電進(jìn)入工作狀態(tài)后,禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分,也不能到電泳槽內(nèi)取放東西,如需要應(yīng)先斷電,以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端,以防漏電。
2.儀器通電后,不要臨時增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭,以防短路現(xiàn)象發(fā)生,雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險絲,但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞。
3、電泳儀/電泳槽使用過程中發(fā)現(xiàn)異?,F(xiàn)象,如較大噪音、放電或異常氣味,須立即切斷電源,進(jìn)行檢修,以免發(fā)生意外事故。
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