高效液相色譜的歷史

1903年俄國植物化學(xué)家茨維特（Tswett）初次提出“色譜法”（Chromatography）和“色譜圖”（Chromatogram）的概念。茨維特使用色譜法 chromatography （來自希臘字， chroma 意思是顏色， graphy 意思是記錄 - 直譯為顏色記錄）來描述他的彩色試驗(yàn)。（令人好奇的是, 俄羅斯名字茨維特意思是顏色。）1930年以后，相繼出現(xiàn)了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術(shù)。1952年，英國學(xué)者M(jìn)artin和Synge 基于他們在分配色譜方面的研究工作，提出了關(guān)于氣－液分配色譜的比較完整的理論和方法，把色譜技術(shù)向前推進(jìn)了一大步，這是氣相色譜在此后的十多年間發(fā)展十分迅速的原因。1958年，基于Moore和Stein的工作，離子交換色譜的儀器化導(dǎo)致了氨基酸分析儀的出現(xiàn)，這是近代液相色譜的一個重要嘗試，但分離效率尚不理想。1960年中后期，氣相色譜理論和實(shí)踐發(fā)展，以及機(jī)械、光學(xué)、電子等技術(shù)上的進(jìn)步，液相色譜又開始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用于液相色譜就出現(xiàn)了HPLC。1970年中期以后，微處理機(jī)技術(shù)用于液相色譜，進(jìn)一步提高了儀器的自動化水平和分析精度。1990年以后，生物工程和生命科學(xué)在國際和國內(nèi)的迅速發(fā)展，為高效液相色譜技術(shù)提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題，如人類基因組計(jì)劃，蛋白質(zhì)組學(xué)有HPLC作預(yù)分離等。

HPLC概述

高效液相色譜法(HPLC)是上個世紀(jì)七十年代迅速發(fā)展起來的一項(xiàng)高效、快速的分析分離技術(shù)，是現(xiàn)代分離測試的重要手段。

色譜法的分離原理是：溶于流動相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過固定相時，由于與固定相(station phase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。

HPLC是在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，其以液體作為流動相，并采用顆粒極細(xì)的高效固定相的柱色譜分離技術(shù)。其分離機(jī)制與常規(guī)柱色譜相同，但填料更加精細(xì)，需高壓泵推動，柱效高，分析速度快。

與氣相色譜不同的是液相色譜中流動相亦參與組分的分離過程，其組成、比例和pH值可靈活調(diào)節(jié)，分離模式多樣。在實(shí)際操作中主要通過改變流動相的組成來調(diào)節(jié)樣品在色譜柱的保留值和選擇性，從而使不同樣品得到分離。

高效液相色譜法的應(yīng)用范圍十分廣泛，對樣品的適用性廣，不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，幾乎所有的化合物包括高沸點(diǎn)、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用高效液相色譜法分析測定，因而彌補(bǔ)了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機(jī)化合物中，可用氣相色譜分析的約占20% ，而80% 則需用高效液相色譜來分析。

高效液相色譜

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜作為檢測系統(tǒng)，經(jīng)純化后的樣品在液相色譜和質(zhì)譜部分經(jīng)過分離和離子化，經(jīng)由檢測器得到質(zhì)譜圖。液質(zhì)聯(lián)用體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢的互補(bǔ)，結(jié)合了色譜對復(fù)雜樣品的高分離能力和質(zhì)譜的高選擇性，高靈敏度及能夠提供相對分子量和結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點(diǎn)，在臨床檢驗(yàn)、臨床研究領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。

液相色譜特點(diǎn)

液相色譜具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視；液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類，海水中的不揮發(fā)烴類，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。使用高效液相色譜儀的領(lǐng)域很多，主要因?yàn)槠潇`敏度高、速度快等等優(yōu)點(diǎn)。高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。